| 内容提要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 序言 | 第11-28页 |
| 1. 蜘蛛丝的研究进展 | 第11-16页 |
| ·蜘蛛丝的组成与结构特点 | 第11-12页 |
| ·蜘蛛丝的特性 | 第12-14页 |
| ·利用现代基因工程技术获取蜘蛛丝 | 第14-15页 |
| ·蜘蛛丝的应用前景 | 第15-16页 |
| 2. 基因工程菌高密度发酵工艺研究进展 | 第16-21页 |
| ·重组大肠杆菌构建的几个影响因素 | 第17页 |
| ·培养条件 | 第17-20页 |
| ·生长抑制因子 | 第20-21页 |
| 3. 组织工程生物支架材料 | 第21-26页 |
| ·生物支架材料的基本要求 | 第21-22页 |
| ·生物支架材料的类型 | 第22-24页 |
| ·生物支架材料制备技术 | 第24-25页 |
| ·组织工程用支架材料的发展方向 | 第25-26页 |
| 4. 本研究的路线与意义 | 第26-28页 |
| ·本研究的路线 | 第26页 |
| ·本研究的意义 | 第26-28页 |
| 第一节 工程菌pNSR-16/BL21(DE3)pLysS摇瓶培养及高密度发酵 | 第28-37页 |
| 1. 材料 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·培养基及主要溶液 | 第28-29页 |
| 2. 方法 | 第29-30页 |
| ·单菌落制备 | 第29页 |
| ·工程菌的摇瓶培养 | 第29页 |
| ·工程菌的10L高密度发酵 | 第29页 |
| ·分析方法 | 第29-30页 |
| 3. 结果 | 第30-35页 |
| ·诱导剂IPTG浓度对表达量的影响 | 第30页 |
| ·诱导时间对表达量的影响 | 第30-31页 |
| ·诱导前菌体浓度对表达量的影响 | 第31-32页 |
| ·甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala)对产物表达的影响 | 第32页 |
| ·温度对产物表达的影响 | 第32-33页 |
| ·pH值对产物表达的影响 | 第33页 |
| ·工程菌PNSR-16分批补料高密度发酵 | 第33-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-37页 |
| 第二节 RGD-蜘蛛拖丝重组蛋白的鉴定与分离纯化 | 第37-43页 |
| 1. 材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·常用溶液 | 第37-38页 |
| 2. 方法 | 第38-39页 |
| ·细胞超声破碎 | 第38页 |
| ·His-Bind亲和层析 | 第38页 |
| ·蛋白质印迹分析 | 第38页 |
| ·等电聚焦电泳 | 第38-39页 |
| ·重组蛛丝蛋白的规模纯化 | 第39页 |
| 3. 结果 | 第39-42页 |
| ·His-Bind亲和层析 | 第39-41页 |
| ·蛋白质印迹分析 | 第41页 |
| ·等电点测定 | 第41页 |
| ·重组蛛丝蛋白的规模纯化 | 第41-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-43页 |
| 第三节 丝蛋白纤维支架材料的制备 | 第43-60页 |
| 1. 材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-45页 |
| ·重组蛛丝蛋白粉在不同溶剂中的溶解性 | 第43页 |
| ·蛋白溶液制备 | 第43页 |
| ·凝固浴的选择 | 第43页 |
| ·模具的选择 | 第43页 |
| ·丝纤维蛋白薄膜的制备 | 第43-44页 |
| ·多孔丝纤维支架材料制备工艺的研究 | 第44-45页 |
| ·分析方法 | 第45页 |
| 3. 结果 | 第45-56页 |
| ·重组蛛丝蛋白粉在不同溶剂中的溶解性 | 第46页 |
| ·凝固浴的选择 | 第46页 |
| ·模具的选择 | 第46-47页 |
| ·丝纤维蛋白薄膜的制备 | 第47-49页 |
| ·多孔丝纤维支架材料制备工艺的研究 | 第49-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-60页 |
| ·重组蛛丝蛋白粉的溶解性及凝固浴、模具选择 | 第56页 |
| ·凝固浴的选择 | 第56-57页 |
| ·模具的选择 | 第57页 |
| ·丝纤维蛋白薄膜的制备 | 第57页 |
| ·多孔丝纤维支架材料制备工艺的研究 | 第57-60页 |
| 第四节 重组蛛丝蛋白支架材料的生物降解行为 | 第60-65页 |
| 1. 材料 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要溶液 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| 2. 方法 | 第60-61页 |
| ·体外水解 | 第60页 |
| ·体外酶解 | 第60页 |
| ·分析方法 | 第60-61页 |
| 3. 结果 | 第61-64页 |
| ·体外水解 | 第61页 |
| ·体外酶解 | 第61-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-65页 |
| 第五节 重组蛛丝蛋白支架材料的细胞毒性试验 | 第65-70页 |
| 1. 材料 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要溶液 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| 2. 方法 | 第65-67页 |
| ·成纤维细胞原代制备 | 第65页 |
| ·MTT实验 | 第65-66页 |
| ·重组蛛丝蛋白支架材料--成纤维细胞的复合培养 | 第66页 |
| ·重组蛛丝蛋白支架材料浸提液的pH与离子强度测定 | 第66-67页 |
| ·分析方法 | 第67页 |
| 3. 结果 | 第67-68页 |
| ·支架材料的浸提液培养成纤维细胞 | 第67页 |
| ·支架材料复合成纤维细胞 | 第67-68页 |
| ·支架材料浸提液的pH与离子强度测定 | 第68页 |
| 4. 讨论 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附图 | 第78-80页 |
| 英文缩略词表 | 第80-81页 |
| 在学期间发表论文及专利申请情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 摘要 | 第83-84页 |