中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-12页 |
1 前言 | 第12-32页 |
·Taq DNA聚合酶结构和功能的研究进展 | 第12-21页 |
·Taq DNA聚合酶的结构和作用机制 | 第12-19页 |
·Taq DNA聚合酶性能的改进的研究进展 | 第19-21页 |
·大片段DNA聚合酶的研究进展 | 第21-26页 |
·Taq DNA聚合酶在遗传育种方面的研究进展 | 第26-30页 |
·随机扩增多态性DNA技术(RAPD) | 第26-27页 |
·已标记序列扩增带技术(SCAR) | 第27页 |
·扩增片段长度多态性技术(AFLP) | 第27-29页 |
·简单序列重复技术(SSR) | 第29-30页 |
·本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
·选题背景和目的 | 第30页 |
·研究的意义 | 第30-32页 |
2 材料和方法 | 第32-54页 |
·材料 | 第32-33页 |
·携带大片段Taq DNA聚合酶的质粒 | 第32页 |
·菌株和质粒 | 第32页 |
·酶 | 第32页 |
·主要反应试剂和试剂盒 | 第32-33页 |
·实验仪器和分析软件 | 第33页 |
·方法 | 第33-54页 |
·克隆载体的构建 | 第33-41页 |
·基因突变 | 第41-44页 |
·LFTM5回复突变子的蛋白表达 | 第44-54页 |
3 结果与分析 | 第54-75页 |
·LFTM5的DNA和氨基酸序列 | 第54-60页 |
·基因回复突变 | 第60页 |
·蛋白表达 | 第60-65页 |
·突变子的聚合功能测定 | 第65-71页 |
·酶蛋白活性测定 | 第71-75页 |
4 讨论 | 第75-85页 |
·基因突变 | 第75-76页 |
·蛋白表达与纯化 | 第76-81页 |
·各突变位点对酶活性的影响评价 | 第81-83页 |
·K230N,A383T,R399H和F492L对酶活性的影响 | 第82页 |
·F389Y对酶活性的影响 | 第82页 |
·不同突变位点对复制忠实性的影响 | 第82-83页 |
·酶蛋白纯度和浓度对PCR的影响 | 第83-85页 |
·蛋白纯度对酶活性的影响 | 第83页 |
·酶蛋白纯度和浓度对PCR的影响 | 第83-85页 |
5 结论 | 第85-87页 |
·LFTM5具有聚合酶的结构特征但无聚合酶活性 | 第85页 |
·各突变位点对酶的聚合活性具有的不同影响力 | 第85页 |
·F389为聚合酶结构上关键功能位点 | 第85页 |
·酶蛋白的纯度和浓度对PCR的影响 | 第85页 |
·酶蛋白的纯度和浓度对pcR的影响 | 第85-87页 |
参考文献 | 第87-93页 |
附录 | 第93-113页 |
致谢 | 第113-114页 |
个人简历 | 第114页 |