| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备以及单抗ELISA检测方法的建立和应用 | 第11-35页 |
| 1 文献综述 | 第11-19页 |
| ·伪狂犬病病原 | 第11-14页 |
| ·病原特征 | 第11页 |
| ·基因组结构 | 第11页 |
| ·伪狂犬病毒的糖蛋白 | 第11-14页 |
| ·血清学诊断检测 | 第14-16页 |
| ·微量血清中和试验(MSN) | 第14页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第14页 |
| ·乳胶凝集试验(LAT) | 第14-15页 |
| ·间接血凝试验(IHA) | 第15页 |
| ·对流免疫电泳(CIE) | 第15页 |
| ·鉴别诊断ELISA | 第15-16页 |
| ·病原学诊断检测 | 第16-18页 |
| ·病毒分离 | 第16-17页 |
| ·兔体接种试验 | 第17页 |
| ·反向间接血凝试验(RPHA) | 第17页 |
| ·免疫荧光试验(IFA) | 第17页 |
| ·双抗体夹心ELISA | 第17页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)技术 | 第17-18页 |
| ·核酸探针技术 | 第18页 |
| ·预防和控制 | 第18-19页 |
| 2 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 3 材料和方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·毒株与细胞系 | 第20页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第20页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第20页 |
| ·酶、抗血清及引物 | 第20-21页 |
| ·实验动物和肉样样本 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备 | 第21-24页 |
| ·抗原的制备 | 第21页 |
| ·动物免疫 | 第21-22页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的活化 | 第22页 |
| ·SP2/0瘤细胞的制备 | 第22页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第22页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第22页 |
| ·细胞融合 | 第22-23页 |
| ·间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清 | 第23页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第23-24页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第24页 |
| ·单克隆抗体的结合活性测定 | 第24页 |
| ·交叉试验 | 第24页 |
| ·双抗体夹心ELISA诊断方法的建立 | 第24-27页 |
| ·抗伪狂犬病毒阳性血清制备与IgG提纯 | 第24页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第24-25页 |
| ·检测方法的条件优化 | 第25页 |
| ·灵敏度测定 | 第25页 |
| ·特异性试验 | 第25页 |
| ·阻断试验 | 第25页 |
| ·重复性和稳定性实验 | 第25-26页 |
| ·病料和肉样的收集及检测 | 第26-27页 |
| 4 结果和分析 | 第27-32页 |
| ·免疫小鼠后血清抗体效价 | 第27页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第27页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第27页 |
| ·单克隆抗体间接免疫荧光 | 第27-28页 |
| ·双抗体夹心ELISA最佳反应条件的确定 | 第28-29页 |
| ·双抗体夹心ELISA敏感性检测 | 第29页 |
| ·双抗体夹心ELISA特异性试验 | 第29页 |
| ·双抗体夹心ELISA阻断试验结果 | 第29-30页 |
| ·双抗体夹心ELISA稳定性检测 | 第30页 |
| ·人工感染仔猪病料检测 | 第30页 |
| ·临床病料检测及与PCR的比较 | 第30-31页 |
| ·市场收集肉样检测结果 | 第31-32页 |
| 5 讨论 | 第32-34页 |
| ·小鼠抗原的纯度 | 第32-33页 |
| ·小鼠免疫方法 | 第33页 |
| ·瘤细胞SP2/0的使用方法 | 第33页 |
| ·关于3G7E3和4A6F5杂交瘤细胞 | 第33页 |
| ·抗体纯化 | 第33页 |
| ·双抗体夹心ELISA检测PrV的可行性 | 第33-34页 |
| ·肉食品市场肉样检侧结果分析 | 第34页 |
| 6 结论 | 第34-35页 |
| 第二章 胸膜肺炎放线杆菌毒素IIIA(ApxIIIA)基因在巴斯德毕赤酵母中的表达APxIIIA-ELISA方法的建立 | 第35-53页 |
| 1 胸膜肺炎放线杆菌文献综述 | 第35-41页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌起源、传播特点和危害 | 第35-36页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌及其流行病学 | 第36页 |
| ·毒力相关因子 | 第36-38页 |
| ·胸膜肺炎实验室诊断方法 | 第38-40页 |
| ·预防和控制 | 第40-41页 |
| 2 研究目的和意义 | 第41页 |
| 3 材料与方法 | 第41-48页 |
| ·材料 | 第41-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·酶及主要试剂 | 第41-42页 |
| ·血清 | 第42-43页 |
| ·细菌培养基 | 第43页 |
| ·质粒抽提 | 第43页 |
| ·E.coli感受态制备 | 第43页 |
| ·酵母培养基 | 第43-44页 |
| ·酵母转化用试剂 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第44页 |
| ·引物及其他 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增ApxIIIA基因 | 第45页 |
| ·DNA的回收 | 第45页 |
| ·连接产物的转化 | 第45页 |
| ·质粒的少量制备 | 第45-46页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第46页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第46页 |
| ·酵母菌的转化(LiCl法) | 第46-47页 |
| ·重组酵母的表达 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE检测及Dot-blotting鉴定 | 第47页 |
| ·APxIIIA-ELISA试验条件的确定 | 第47-48页 |
| ·酶标板保存期的测定 | 第48页 |
| ·ApxIIIA-ELISA与IHA比较 | 第48页 |
| 4 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·PCR扩增结果的鉴定 | 第48-49页 |
| ·转移载体和表达载体的构建 | 第49页 |
| ·重组表达蛋白SDS—PAGE检测及Dot-blotting分析 | 第49-50页 |
| ·ELISA结果判定标准的确定 | 第50页 |
| ·交叉反应 | 第50页 |
| ·重复性实验 | 第50页 |
| ·APxIIIA-ELISA与IHA之间的比较 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-52页 |
| ·毒素及其表达系统的选择 | 第51页 |
| ·关于表达蛋白的检测 | 第51页 |
| ·关于ApxIIIA-ELISA方法 | 第51页 |
| ·ApxIIIA-ELISA和IHA检测结果分析 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 缩略表 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
