中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
缩略语 | 第9-10页 |
第一部分 可调控的烟草叶绿体表达体系研究 | 第10-73页 |
综述 | 第10-29页 |
1. 叶绿体遗传学特征与叶绿体转化特点 | 第10-14页 |
2. 高等植物叶绿体转化技术的现状 | 第14-23页 |
3. 叶绿体转化的应用 | 第23-27页 |
4. 叶绿体转化技术的局限和发展方向 | 第27-29页 |
材料与方法 | 第29-47页 |
1. 实验材料 | 第29-32页 |
1.1 植物材料 | 第29页 |
1.2 菌株和质粒 | 第29页 |
1.3 工具酶和分子生物学试剂 | 第29页 |
1.4 主要仪器 | 第29页 |
1.5 主要溶液和培养基 | 第29-32页 |
2. 实验方法 | 第32-47页 |
2.1 碱裂解法小量制备E.coli 质粒 | 第32-33页 |
2.2 PCR | 第33-34页 |
2.3 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
2.4 DNA片段的回收 | 第34-35页 |
2.5 PCR产物的加A反应 | 第35-36页 |
2.6 酶切反应 | 第36页 |
2.7 连接反应 | 第36页 |
2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
2.9 E.coli的转化 | 第37页 |
2.10 甘油管的制备 | 第37页 |
2.11 BADH的原核表达 | 第37-38页 |
2.12 农杆菌感受态制备法 | 第38页 |
2.13 农杆菌的转化 | 第38-39页 |
2.14 根癌农杆菌-Ti质粒介导法转化烟草 | 第39-40页 |
2.15 烟草总 DNA提取步骤 | 第40页 |
2.16 烟草 RNA提取及 DNA的去除 | 第40页 |
2.17 RT-PCR(one step) | 第40-41页 |
2.18 转基因烟草的 Southern-blot检测 | 第41-43页 |
2.19 烟草 Alc启动子启动 T7 RNA Polymerase的诱导 | 第43页 |
2.20 基因枪转化烟草叶绿体 | 第43-47页 |
结果与分析 | 第47-73页 |
1. 叶绿体表达载体的构建 | 第47-57页 |
1.1 BADH表达盒的构建 | 第48-51页 |
1.2 莴苣叶绿体转化表达载体pLGB和pLNB的构建 | 第51-53页 |
1.3 烟草叶绿体转化表达载体pTGB和 PTNB的构建 | 第53-56页 |
1.4 构建载体所用引物序列及位置 | 第56-57页 |
2. BADH基因的原核表达 | 第57-58页 |
3. T7 RNA聚合酶基因在烟草核中的表达 | 第58-62页 |
4. 以BADH 基因作为筛选标记基因对烟草叶绿体进行转化 | 第62-70页 |
4.1 甜菜碱醛筛选浓度的选择 | 第62-63页 |
4.2 用莴苣叶绿体转化表达载体pLGB和pLNB转化烟草叶绿体的结果 | 第63-68页 |
4.3 用烟草叶绿体转化表达载体 pTGB和 pTNB转化烟草叶绿体的结果 | 第68-70页 |
4.4 小结 | 第70页 |
5. 以aadA基因作为筛选标记基因对 T7 RNA聚合酶核转化烟草的叶绿体进行转化 | 第70-72页 |
5.1 Spe和 Str筛选浓度的确定 | 第70-71页 |
5.2 烟草叶绿体转化表达载体 pTCG对 T7 RNA聚合酶核转化烟草叶绿体的转化 | 第71-72页 |
6. 总结 | 第72-73页 |
第二部分 甜菜碱醛对莴苣分化再生影响的研究 | 第73-79页 |
简介 | 第73-74页 |
材料与方法 | 第74-75页 |
1. 实验材料 | 第74页 |
1.1 植物材料 | 第74页 |
1.2 药品 | 第74页 |
1.3 培养基 | 第74页 |
2. 实验方法 | 第74-75页 |
2.1 种子的萌发 | 第74页 |
2.2 愈伤诱导与分化培养 | 第74页 |
2.3 再生植株的生根 | 第74-75页 |
结果与分析 | 第75-79页 |
1. 愈伤组织诱导 | 第75页 |
2. 愈伤组织的分化与再生 | 第75-77页 |
3. 分析与讨论 | 第77-79页 |
参考文献 | 第79-91页 |
在读期间发表的文章、专利及参与课题 | 第91页 |
论文创新点 | 第91-92页 |
致谢 | 第92页 |