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基因修饰及不同启动子表达新城疫病毒F和HN蛋白重组马立克氏病毒免疫效果评价

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
英文缩略表第12-14页
第一章 引言第14-21页
   ·MDV 概述第14-18页
     ·MDV 及其在疱疹病毒科的分类第14页
     ·MDV 基因组和蛋白第14-16页
     ·生物学特性及其感染机制第16-17页
     ·MDV 疫苗第17页
     ·人类疾病的模型第17-18页
   ·NDV 概述第18-19页
     ·ND 及 NDV 的历史第18页
     ·NDV 形态学及其理化、生物学活性第18-19页
     ·NDV 基因组及蛋白第19页
   ·重组病毒研究现状第19-20页
   ·本研究目的意义第20-21页
第二章 表达 wF 基因的 rMDVs 的构建第21-33页
   ·材料第21-22页
     ·载体、基因工程菌株和病毒毒株第21页
     ·主要仪器和试剂第21-22页
     ·SPF 鸡胚第22页
   ·方法第22-26页
     ·引物设计与合成第22页
     ·病毒基因扩增及表达载体构建第22-23页
     ·重组病毒转移载体的构建及鉴定第23页
     ·转移载体质粒的提取和纯化第23-24页
     ·转染用 MDV 感染细胞总 DNA 的制备第24页
     ·转移载体与总 DNA 共转染 CEF第24页
     ·重组病毒的筛选与纯化第24页
     ·重组病毒的 PCR 鉴定第24-25页
     ·间接免疫荧光检测(IFA)第25页
     ·wF 表达的 western blot 检测第25页
     ·wF 基因的 southern blot 检测第25页
     ·重组病毒生长特性的测定第25-26页
   ·结果第26-29页
     ·wF 基因及其真核表达载体的鉴定第26页
     ·重组病毒转移载体的构建及鉴定第26-27页
     ·重组病毒的 PCR 鉴定第27页
     ·间接免疫荧光检测第27-28页
     ·重组病毒中插入基因的 southern blot 检测第28页
     ·重组病毒中插入基因的 western blot 检测第28-29页
     ·重组病毒生长特性的测定第29页
   ·讨论第29-33页
     ·同源重组位点的选择第29-30页
     ·表达载体构建第30页
     ·真核细胞转染方法的比较第30-31页
     ·gpt 筛选系统工作条件的优化第31-32页
     ·加压筛选培养液的更换方法第32-33页
第三章 表达 NDV oF 和 oF/oHN 基因的 rMDVs 构建第33-41页
   ·材料第33页
     ·载体、基因工程菌株和病毒毒株第33页
     ·主要仪器和试剂第33页
   ·方法第33-36页
     ·引物设计与合成第33-34页
     ·优化基因表达盒扩增及测序第34页
     ·重组病毒转移载体的构建及鉴定第34-35页
     ·转移载体质粒的提取和纯化第35页
     ·转移载体与感染细胞总 DNA 共转染 CEF第35页
     ·重组病毒的筛选与纯化第35页
     ·重组病毒的 PCR 鉴定第35页
     ·间接免疫荧光检测(IFA)第35-36页
     ·外源基因表达的 western blot 检测第36页
     ·外源基因的 southern blot 检测第36页
     ·重组病毒生长特性的测定第36页
   ·结果第36-40页
     ·oF 及 oHN 表达盒扩增第36-37页
     ·重组病毒转移载体的构建及鉴定第37页
     ·重组病毒的 PCR 鉴定第37-38页
     ·间接免疫荧光检测第38页
     ·重组病毒中插入基因的 southern blot 检测第38-39页
     ·重组病毒中插入基因的 western blot 检测第39页
     ·重组病毒生长特性的测定第39-40页
   ·讨论第40-41页
第四章 动物试验第41-51页
   ·材料第41-42页
     ·试验用 SPF 鸡和鸡胚第41页
     ·病毒和疫苗第41页
     ·试剂和仪器第41-42页
   ·方法第42-44页
     ·病毒培养和繁殖第42页
     ·重组病毒 MDV 攻毒免疫保护性试验第42-43页
     ·重组病毒针对 NDV 攻毒免疫保护性试验第43-44页
   ·结果第44-48页
     ·重组病毒免疫鸡群 MDV 攻毒试验第44-45页
     ·重组病毒免疫鸡的 NDV 攻毒试验第45-48页
   ·讨论第48-51页
     ·MDV 攻毒保护试验第48-49页
     ·NDV 攻毒免疫保护试验分析第49-51页
第五章 结论第51-52页
参考文献第52-58页
致谢第58-59页
作者简历第59页

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