尖孢镰刀菌西瓜专化型遗传转化体系和突变体库的建立
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 引言 | 第12页 |
| 镰刀菌的概况 | 第12-30页 |
| 1 镰刀菌引起的西瓜枯萎病及其防治 | 第12-14页 |
| ·西瓜枯萎病的流行及危害性 | 第12-13页 |
| ·西瓜枯萎病的防治 | 第13-14页 |
| 2 镰刀菌的分子遗传学研究 | 第14-15页 |
| 3 关于基因标记技术 | 第15-18页 |
| ·基因标记的概念 | 第15-16页 |
| ·基因标记技术在真菌的分子遗传学研究中的应用 | 第16-18页 |
| 4 真菌的遗传转化 | 第18-27页 |
| ·DNA的直接转移法 | 第18-20页 |
| ·电击法 | 第18-19页 |
| ·基因枪法 | 第19页 |
| ·显微注射法 | 第19页 |
| ·激光微束穿孔法 | 第19-20页 |
| ·质粒载体法 | 第20-27页 |
| ·PEG介导的遗传转化 | 第20页 |
| ·REMI法 | 第20-21页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第21-27页 |
| ·根癌农杆菌介导真菌遗传转化的机理 | 第22-23页 |
| ·T-DNA在真菌中的存在方式 | 第23-26页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化的真菌种类 | 第26-27页 |
| 5 本研究的立论依据和研究意义 | 第27页 |
| 6 本研究的具体研究内容及技术路线 | 第27-30页 |
| ·具体研究内容 | 第27-29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 材料和方法 | 第30-44页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| ·供试菌和转化质粒 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·培养基的制备 | 第30-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-35页 |
| ·建立诱导镰刀菌突变的转化体系 | 第32-35页 |
| ·镰刀菌最佳生长条件的筛选 | 第32-33页 |
| ·抑制镰刀菌生长的潮霉素最佳抑制浓度的筛选 | 第33页 |
| ·抑制农杆菌生长的抗生素最佳浓度筛选 | 第33-34页 |
| ·共培养的方法 | 第34-35页 |
| ·菌体准备 | 第34-35页 |
| ·共培养 | 第35页 |
| 3 镰刀菌转化子的检测 | 第35-40页 |
| ·TF和WTF对潮霉素敏感性对比测定 | 第35页 |
| ·不同浓度潮霉素下TF和WTF的生长状况 | 第35-36页 |
| ·镰刀菌PCR检测 | 第36-39页 |
| ·镰刀菌总DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·从农杆菌提取Ti质粒DNA(Mini法) | 第37-38页 |
| ·PCR检测方法 | 第38-39页 |
| ·TF抗潮霉素稳定性测验 | 第39-40页 |
| 4 镰刀菌高效遗传转化共培养方法的优化 | 第40-42页 |
| ·共培养时间的确定 | 第40页 |
| ·AS最佳浓度和处理历时的确定 | 第40-41页 |
| ·农杆菌最佳OD_(660)值的确定 | 第41页 |
| ·WTF分生孢子最佳浓度的确定 | 第41页 |
| ·不同质粒的转化率对比 | 第41-42页 |
| 5 镰刀菌突变体库的构建 | 第42页 |
| 6 形态变异突变体和致病相关突变体的筛选 | 第42-44页 |
| 结果与分析 | 第44-63页 |
| 1 建立诱导镰刀菌突变的转化体系 | 第44-48页 |
| ·WTF的生长条件测定结果 | 第44-45页 |
| ·WTF对潮霉素的忍耐能力测定结果 | 第45-46页 |
| ·农杆菌对头孢霉素敏感性的测定结果 | 第46-48页 |
| ·共培养方法的筛选 | 第48页 |
| 2 镰刀菌转化子的检测 | 第48-53页 |
| ·TF和WTF对潮霉素敏感性对比测定结果 | 第48-49页 |
| ·在不同浓度潮霉素下TF与WTF的生长状况 | 第49-52页 |
| ·TF的PCR分析 | 第52页 |
| ·转化子稳定性测验 | 第52-53页 |
| 3 共培养方法优化的结果 | 第53-56页 |
| ·WTF与农杆菌共培养的历时 | 第53页 |
| ·AS浓度及其处理农杆菌时间的测定结果 | 第53-55页 |
| ·农杆菌浓度筛选结果 | 第55页 |
| ·WTF分生孢子浓度的筛选 | 第55-56页 |
| ·共培养用质粒农杆菌的筛选 | 第56页 |
| 4 WTF的大规模遗传转化结果 | 第56-58页 |
| 5 形态变异突变体的筛选结果 | 第58-60页 |
| 6 致病相关突变体的筛选结果 | 第60-63页 |
| ·接种用的分生孢子浓度的筛选结果 | 第60页 |
| ·胚根接种法筛选结果 | 第60-61页 |
| ·盆钵幼苗筛选结果 | 第61-63页 |
| 讨论与结论 | 第63-68页 |
| 1 关于WTF的遗传转化体系 | 第63-65页 |
| 2 关于WTF的突变体筛选 | 第65-67页 |
| ·关于WTF致病相关突变体 | 第65-66页 |
| ·关于WTF插入突变以后的生理、形态学表型变化 | 第66-67页 |
| 3 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附图 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
