| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-20页 |
| 1 抗冻蛋白的研究进展 | 第9-15页 |
| ·抗冻蛋白(AFPs)的生物学特性 | 第9-10页 |
| ·抗冻蛋白(AFPs)的类型及结构 | 第10-14页 |
| ·AFPs的作用机理 | 第14页 |
| ·AFPs的应用研究 | 第14-15页 |
| 2 转基因动物的研究进展 | 第15-18页 |
| ·转基因动物的应用价值 | 第15-16页 |
| ·动物转基因技术 | 第16-18页 |
| 3 罗氏沼虾简介及本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 材料和方法 | 第20-32页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验用虾 | 第20页 |
| ·细菌菌株及载体 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-32页 |
| ·sbwAFP基因的获得 | 第21-24页 |
| ·重叠序列延伸合成sbwAFP | 第21-23页 |
| ·大量扩增合成的sbwAFP | 第23-24页 |
| ·纯化合成的sbwAFP | 第24页 |
| ·质粒pCMV-sbwAFP-SV40UTR的构建 | 第24-26页 |
| ·质粒pCMV-sbwAFP-SV40UTR转化E.coli JM 109 | 第26-27页 |
| ·E.coli感受态的制备 | 第26页 |
| ·转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| ·双酶切 | 第28页 |
| ·质粒pCMV-sbwAFP-SV40UTR的大量制备 | 第28-29页 |
| ·SMI将外源基因导入罗氏沼虾 | 第29页 |
| ·外源DNA整合的检测 | 第29-31页 |
| ·胚胎基因组DNA的提取 | 第29-31页 |
| ·PCR检测 | 第31页 |
| ·基因转移率的计算 | 第31页 |
| ·外源基因表达的检测 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-39页 |
| 1 sbwAFP基因的获得 | 第32页 |
| 2 阳性克隆的筛选和检测结果 | 第32-34页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| ·重组质粒大量制备的检测 | 第33-34页 |
| 3 胚外质粒DNA残留可能性的排除 | 第34-36页 |
| ·胚胎清洗水样的检测 | 第34-35页 |
| ·DNaseⅠ用量的检测 | 第35-36页 |
| 4 虾胚胎中目的DNA整合的检测 | 第36-39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 1 用精子介导法进行转基因的可行性 | 第39-40页 |
| 2 抱卵孵化过程中胚胎丢失的原因 | 第40-41页 |
| 3 注射剂量对转基因率的影响 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
