| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-41页 |
| 1 植物耐盐效应决定子(determinants) | 第12-22页 |
| ·植物耐盐效应分子功能分类 | 第12-20页 |
| ·离子均衡 | 第12-19页 |
| ·质膜和液泡膜质子电化学梯度 | 第12-16页 |
| ·Na~+的稳态 | 第16-17页 |
| ·K~+的均衡 | 第17-18页 |
| ·Cl~-的吸收和区隔化 | 第18页 |
| ·Ca~(2+)的稳态 | 第18-19页 |
| ·渗透调节物质的合成 | 第19页 |
| ·自由基清除 | 第19页 |
| ·逆境诱导蛋白Lea蛋白及类Lea蛋白 | 第19-20页 |
| ·水的吸收及转运 | 第20页 |
| ·植物耐盐调节分子 | 第20-22页 |
| ·SOS(salt over sensitive)信号通路 | 第20页 |
| ·蛋白激酶途径 | 第20-21页 |
| ·磷脂酶途径 | 第21页 |
| ·ABA及渗透胁迫信号 | 第21-22页 |
| ·转录因子 | 第22页 |
| 2 植物耐盐基因工程 | 第22-26页 |
| ·渗透保护物质的代谢工程 | 第23-24页 |
| ·自由基清除的基因工程 | 第24页 |
| ·离子均衡的基因工程 | 第24-25页 |
| ·胁迫相关蛋白的基因工程 | 第25页 |
| ·信号转导通路分子的基因工程策略 | 第25-26页 |
| 3 植物耐盐新基因的发掘 | 第26-33页 |
| ·功能缺失突变(loss-of-function) | 第26-31页 |
| ·理化诱变 | 第26-27页 |
| ·基因标鉴法 | 第27-29页 |
| ·T-DNA插入 | 第27-28页 |
| ·转座子标签法(Transposon tagging) | 第28-29页 |
| ·基因敲除(gene knock-out) | 第29-31页 |
| ·反义分子 | 第29-30页 |
| ·RNAi | 第30-31页 |
| ·功能获得突变(gain-of-function) | 第31-33页 |
| ·激发标签(Activation Tagging) | 第31-32页 |
| ·基因陷阱 | 第32-33页 |
| ·SARE系统(sense／antisense RNA expression system) | 第33页 |
| 4 植物ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究进展 | 第33-41页 |
| ·多不饱和脂肪酸的作用、分布及生物合成 | 第33-35页 |
| ·脂肪酸去饱和酶 | 第35-37页 |
| ·分类及分布 | 第35页 |
| ·脂酰去饱和酶的基本结构和催化机理 | 第35-37页 |
| ·作用特征 | 第37页 |
| ·植物脂肪酸去饱和酶 | 第37-39页 |
| ·植物脂酰ACP去饱和酶 | 第38-39页 |
| ·植物脂酰-脂去饱和酶 | 第39页 |
| ·植物ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究进展 | 第39-41页 |
| 第二部分 实验论文 | 第41-81页 |
| 第一节 实验材料及方法 | 第41-56页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-56页 |
| ·基本分子生物学实验技术 | 第42-51页 |
| ·质粒的提取(碱裂解法) | 第42页 |
| ·目的片断的回收(Gene Clean法) | 第42-43页 |
| ·质粒的酶切与连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第43页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第43-44页 |
| ·直接转化法 | 第43-44页 |
| ·电击法 | 第44页 |
| ·农杆菌质粒的提取与鉴定 | 第44页 |
| ·DNA的提取及Southern分析 | 第44-46页 |
| ·DNA微量提取法(SDS法) | 第44-45页 |
| ·SDS法大量提取基因组DNA | 第45页 |
| ·Southern杂交分析 | 第45-46页 |
| ·RNA的提取及Northern分析 | 第46-47页 |
| ·异硫氰酸胍法提取总RNA | 第46页 |
| ·Northern分析 | 第46-47页 |
| ·膜微囊的提取及Western分析 | 第47-48页 |
| ·液泡膜微囊的制备 | 第47-48页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE及Western-blot免疫分析 | 第48页 |
| ·RT-PCR | 第48-49页 |
| ·Trizol试剂提取植物总RNA | 第48页 |
| ·RT-PCR | 第48-49页 |
| ·拟南芥的培养及转化 | 第49-50页 |
| ·植物的生长 | 第49页 |
| ·菌液的准备 | 第49页 |
| ·渗透转化 | 第49-50页 |
| ·转基因植株的筛选及遗传分析 | 第50页 |
| ·转化子的筛选 | 第50页 |
| ·转化子的遗传分析 | 第50页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第50-51页 |
| ·野生型与转基因拟南芥植株在含NaCl培养基上的萌发和生长情况 | 第50页 |
| ·基本生理指标的测定 | 第50-51页 |
| ·过量表达盐地碱蓬cDNA文库对拟南芥耐盐性的影响 | 第51-53页 |
| ·载体的构建 | 第51-52页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第52页 |
| ·盐地碱蓬cDNA过量表达文库的构建 | 第52页 |
| ·cDNA过量表达文库的鉴定 | 第52页 |
| ·过量表达文库质粒的制备 | 第52页 |
| ·随机单克隆的酶切及PCR鉴定 | 第52页 |
| ·农杆菌的转化及鉴定 | 第52页 |
| ·拟南芥的转化及筛选 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的分析 | 第53页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第53页 |
| ·遗传学分析 | 第53页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第53页 |
| ·基因的克隆与序列测定 | 第53页 |
| ·过量表达SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响 | 第53-55页 |
| ·载体的构建 | 第53-54页 |
| ·盐地碱蓬SsNHX1基因和拟南芥AVP1基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·双效植物表达载体pCAMBIA1300-SsNHX1-AVP1的构建 | 第54页 |
| ·植物表达载体的转化 | 第54页 |
| ·转化子的筛选及遗传分析 | 第54页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1／AVP1基因检测 | 第54页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的PCR检测 | 第54页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的RT-PCR检测 | 第54页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的Southern和Northern检测 | 第54页 |
| ·转基因植株外源AVP1基因的Western-blot检测 | 第54页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第54-55页 |
| ·盐地碱蓬质体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因(SsFAD7)的克隆、表达分析及转化 | 第55-56页 |
| ·盐地碱蓬质体ω-3脂肪酸脱饱和酶因(SsFAD7)的克隆、测序及序列分析 | 第55页 |
| ·不同胁迫处理对SsFAD7表达的影响 | 第55页 |
| ·不同NaCl处理浓度对SsFAD7表达的影响 | 第55页 |
| ·不同NaCl处理时间对SsFAD7表达的影响 | 第55页 |
| ·不同伤害处理时间对SsFAD7表达的影响 | 第55页 |
| ·不同低温处理时间对SsFAD7表达的影响 | 第55页 |
| ·表达载体的构建、转化及筛选 | 第55-56页 |
| 第二节 实验结果与分析 | 第56-76页 |
| 1 过量表达碱蓬cDNA文库对拟南芥耐盐性的影响 | 第56-61页 |
| ·cDNA文库过量表达载体的检测 | 第56-57页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第56页 |
| ·随机单克隆的酶切鉴定 | 第56页 |
| ·过量表达载体的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| ·农杆菌的电击转化检测 | 第57页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第57页 |
| ·转基因植株的分析 | 第57-61页 |
| ·转基因植株的遗传学分析 | 第57页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第58-61页 |
| ·初步分析 | 第58页 |
| ·转基因植株在不同盐胁迫条件下的萌发情况 | 第58-59页 |
| ·盐处理对转基因植株与野生型植株鲜、干重的影响 | 第59页 |
| ·转基因植株与野生型植株莲座叶中Na~+、K~+含量及K~+／Na~+比的变化情况 | 第59-60页 |
| ·转基因植株与野生型植株组织中脯氨酸含量的变化情况 | 第60页 |
| ·黑心基因植株与野生型植株组织中脯组织中脿氨含量的变化情况 | 第60-61页 |
| ·转基因植株与野生型植株组织中渗透势的变化 | 第61页 |
| 2 过量表达SsNHX1-AVP1对拟南芥其耐盐性的影响 | 第61-69页 |
| ·RT-PCR克隆盐地碱蓬SsNHX1及拟南芥AVP1 | 第61-62页 |
| ·双价表达载体的构建 | 第62页 |
| ·转基因拟南芥检测 | 第62-65页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第62-63页 |
| ·纯系转基因植株的获得 | 第63页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的PCR与RT-PCR检测 | 第63-64页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的Southern-blot检测 | 第64-65页 |
| ·转基因植株外源SsNHX1基因的Northern-blot检测 | 第65页 |
| ·转基因植株外源AVP1基因的Western-blot检测 | 第65页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第65-69页 |
| ·转基因植株在不同浓度NaCl处理下的生长情况 | 第65-66页 |
| ·转基因植株在不同盐胁迫条件下的生长情况 | 第66页 |
| ·盐处理对转基因植株与野生型植株鲜重、干重的影响 | 第66页 |
| ·转基因植株与野生型植株中Na~+、K~+含量及K~+／Na~+比的变化情况 | 第66-67页 |
| ·盐处理对转基因植株与野生型植株组织中光合的影响 | 第67-68页 |
| ·转基因植株与野生型植株组织中脯氨酸含量的变化情况 | 第68页 |
| ·转基因植株与野生型植株组织中渗透势的变化 | 第68-69页 |
| ·转基因植株与野生型植株叶片液泡膜H~+-PPase活性的测定 | 第69页 |
| 3 盐地碱蓬质体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因(SsFAD7)的克隆、表达分析及转化 | 第69-76页 |
| ·盐地碱蓬质体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因(SsFAD7)的克隆、测序及序列分析 | 第69-73页 |
| ·不同胁迫处理对SsFAD7表达的影响 | 第73-75页 |
| ·不同NaCl处理浓度对SsFAD7表达的影响 | 第73-74页 |
| ·不同NaCl处理时间对SsF4D7表达的影响 | 第74页 |
| ·不同伤害处理时间对SsFAD7表达的影响 | 第74页 |
| ·不同低温处理时间对SsFAD7表达的影响 | 第74-75页 |
| ·表达载体的构建、转化及筛选 | 第75-76页 |
| 第三节 讨论 | 第76-81页 |
| 1 Na~+区隔化与植物耐盐性 | 第76-78页 |
| 2 SARE系统与植物耐盐新基因的发掘 | 第78-79页 |
| 3 ω3脂肪酸去饱和酶基因与植物耐逆性 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-97页 |
| 攻读博士学位期间的学术论文与著作目录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
