| 符号说明 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-18页 |
| 英文摘要 | 第18-26页 |
| 前言 | 第26-31页 |
| 第一章 目的基因的获得、克隆与序列分析 | 第31-56页 |
| 第1节 多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA提取方法的比较及不同DNA聚合酶扩增DNA长片段的效果 | 第31-40页 |
| 1．1 前言 | 第31页 |
| 1．2 材料 | 第31-32页 |
| 1．3 方法 | 第32-34页 |
| 1．3．1 EMML的制备 | 第32页 |
| 1．3．2 用不同方法制备EMML RNA或mRNA | 第32-33页 |
| 1．3．3 不同方法制备的EMML总RNA或mRNA电泳 | 第33页 |
| 1．3．4 RT-PCR对不同EMML核酸提取物的鉴定 | 第33-34页 |
| 1．3．5 不同耐热DNA聚合酶扩增效果的比较 | 第34页 |
| 1．4 结果 | 第34-38页 |
| 1．5 讨论 | 第38-40页 |
| 第2节 EM-elp基因的克隆 | 第40-51页 |
| 2．1 前言 | 第40页 |
| 2．2 材料 | 第40页 |
| 2．3 方法 | 第40-48页 |
| 2．3．1 EMML RNA的制备 | 第41页 |
| 2．3．2 RT-PCR扩增目的基因 | 第41-42页 |
| 2．3．3 目的基因的克隆 | 第42-47页 |
| 2．3．4 阳性克隆的筛选及重组质粒鉴定 | 第47-48页 |
| 2．4 结果 | 第48-50页 |
| 2．5 讨论 | 第50-51页 |
| 第3节 中国四川株多房棘球绦虫elp克隆基因的序列分析 | 第51-56页 |
| 3．1 前言 | 第51页 |
| 3．2 材料 | 第51页 |
| 3．3 方法 | 第51页 |
| 3．4 结果 | 第51-53页 |
| 3．5 讨论 | 第53-56页 |
| 第二章 EM-elp基因原核表达载体的构建及重组抗原的免疫作用 | 第56-90页 |
| 第1节 融合表达质粒的构建及鉴定 | 第56-60页 |
| 1．1 前言 | 第56页 |
| 1．2 材料 | 第56页 |
| 1．3 方法 | 第56-59页 |
| 1．4 结果 | 第59-60页 |
| 1．5 讨论 | 第60页 |
| 第2节 elp基因与硫氧环蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达与鉴定 | 第60-68页 |
| 2．1 前言 | 第60页 |
| 2．2 材料 | 第60-61页 |
| 2．3 方法 | 第61-65页 |
| 2．3．1 ELP抗原在大肠杆菌中的诱导表达 | 第61页 |
| 2．3．2 SDS-PAGE鉴定 | 第61-63页 |
| 2．3．3 表达蛋白的免疫鉴定（Western blot) | 第63-65页 |
| 2．3．4 表达蛋白的稳定性观察 | 第65页 |
| 2．4 结果 | 第65-68页 |
| 2．5 讨论 | 第68页 |
| 第3节 elp基因非融合表达载体的构建诱导表达与鉴定 | 第68-74页 |
| 3．1 前言 | 第69页 |
| 3．2 材料 | 第69页 |
| 3．3 方法 | 第69-71页 |
| 3．3．1 技术线路 | 第69-70页 |
| 3．3．2 非融合表达载体的构建与转化 | 第70-71页 |
| 3．3．3 表达蛋白与天然ELP的比较 | 第71页 |
| 3．3．4 elp基因的非融合表达与鉴定 | 第71页 |
| 3．4 结果 | 第71-73页 |
| 3．5 讨论 | 第73-74页 |
| 第4节 elp基因原核表达非融合重组蛋白的大量纯化与鉴定 | 第74-80页 |
| 4．1 前言 | 第74页 |
| 4．2 材料 | 第74页 |
| 4．3 方法 | 第74-77页 |
| 4．4 结果 | 第77-80页 |
| 4．5 讨论 | 第80页 |
| 第5节 ELP非融合重组蛋白免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答 | 第80-90页 |
| 5．1 前言 | 第80-81页 |
| 5．2 材料 | 第81页 |
| 5．3 方法 | 第81-84页 |
| 5．3．1 动物免疫 | 第81页 |
| 5．3．2 检测样本的收集与制备 | 第81-82页 |
| 5．3．3 血清特异性抗体亚类检测 | 第82页 |
| 5．3．4 脾PMNC产生的IFN-γ、IL-4、IL-12检测 | 第82-83页 |
| 5．3．5 淋巴细胞增殖实验 | 第83-84页 |
| 5．4 结果 | 第84-88页 |
| 5．5 讨论 | 第88-90页 |
| 第三章 EM-elp抗原基因真核载体的构建及其免疫作用研究 | 第90-125页 |
| 第1节 真核表达载体pcD-ELP的构建与鉴定 | 第90-94页 |
| 1．1 前言 | 第90页 |
| 1．2 材料 | 第90-91页 |
| 1．3 方法 | 第91-93页 |
| 1．4 结果 | 第93-94页 |
| 1．5 讨论 | 第94页 |
| 第2节 elp基因真核表达质粒pcD-ELP在COS7细胞中的表达 | 第94-103页 |
| 2．1 前言 | 第94-95页 |
| 2．2 材料 | 第95页 |
| 2．3 方法 | 第95-100页 |
| 2．3．1 质粒的大量制备与鉴定 | 第95-97页 |
| 2．3．2 COS7细胞的培养 | 第97页 |
| 2．3．3 质粒转染COS7细胞（电转染法）与转染细胞的培养表达 | 第97-98页 |
| 2．3．4 特异elp-mRNA的检测 | 第98-99页 |
| 2．3．5 dot-ELISA对表达产物的鉴定 | 第99页 |
| 2．3．6 免疫组化对表达产物的鉴定 | 第99-100页 |
| 2．4 结果 | 第100-102页 |
| 2．5 讨论 | 第102-103页 |
| 第3节 多房棘球绦虫elp基因DNA疫苗免疫BALB/c小鼠引起的免疫应答 | 第103-110页 |
| 3．1 前言 | 第103页 |
| 3．2 材料 | 第103页 |
| 3．3 方法 | 第103-104页 |
| 3．3．1 动物免疫 | 第103-104页 |
| 3．3．2 检测样本的收集与制备 | 第104页 |
| 3．3．3 血清特异性抗体亚类检测 | 第104页 |
| 3．3．4 脾PMNC产生的IFN-γ、IL-4、IL-12测检 | 第104页 |
| 3．3．5 淋巴细胞增殖实验 | 第104页 |
| 3．3．6 肌肉组织的免疫组化 | 第104页 |
| 3．4 结果 | 第104-109页 |
| 3．5 讨论 | 第109-110页 |
| 第4节 小鼠IL-12真核表达质粒对elp基因DNA疫苗作用的影响 | 第110-120页 |
| 4．1 前言 | 第110-111页 |
| 4．2 材料 | 第111页 |
| 4．3 方法 | 第111-112页 |
| 4．4 结果 | 第112-118页 |
| 4．5 讨论 | 第118-120页 |
| 第5节 多房棘球绦虫elp基因DNA疫苗与ELP亚单位疫苗的比较 | 第120-125页 |
| 5．1 特异性抗体比较 | 第120-121页 |
| 5．2 脾PMNC产生的IFN-γ比较 | 第121-122页 |
| 5．3 脾淋巴细胞增殖能力比较 | 第122-123页 |
| 5．4 疫苗的安全性 | 第123-125页 |
| 全文小结 | 第125-127页 |
| 本课题的创新点 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-134页 |
| 文献综述 | 第134-154页 |
| 文献综述一：棘球蚴分子生物学研究现状 | 第134-144页 |
| 文献综述二：多房棘球绦虫重组抗原研究 | 第144-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第155页 |
