英文缩略表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
综述部分 | 第8-22页 |
1. 引言 | 第8页 |
2. 水稻抗白叶枯病育种 | 第8-13页 |
2.1 水稻白叶枯病与抗病育种 | 第8-10页 |
2.2 Xa21与水稻抗白叶枯病育种 | 第10-13页 |
3. 水稻抗螟虫育种 | 第13-16页 |
3.1 水稻抗虫基因工程 | 第13页 |
3.2 Bt基因与水稻抗虫基因工程 | 第13-16页 |
4. 水稻基因工程 | 第16-21页 |
4.1 水稻遗传转化中常用的选择标记基因 | 第16页 |
4.2 水稻遗传转化方法 | 第16-18页 |
4.2.1 PEG介导的转化方法 | 第16页 |
4.2.2 花粉管通道法 | 第16页 |
4.2.3 基因枪法 | 第16-17页 |
4.2.4 农杆菌介导转化法 | 第17-18页 |
4.3 转基因的表达 | 第18-21页 |
4.3.1 转基因沉默 | 第19-20页 |
4.3.2 无标记基因的转基因植株 | 第20-21页 |
5. 培育多抗的水稻种质材料 | 第21-22页 |
5.1 同时转多个基因于植物受体材料 | 第21页 |
5.2 培育多抗的水稻种质材料 | 第21-22页 |
研究论文 | 第22-57页 |
1. 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
2. 材料与方法 | 第23-34页 |
2.1 材料 | 第23-25页 |
2.1.1 植物材料 | 第23页 |
2.1.2 转化受体 | 第23页 |
2.1.3 菌株和质粒 | 第23-24页 |
2.1.4 病原菌小种 | 第24页 |
2.1.5 培养基 | 第24-25页 |
2.1.6 酶及试剂盒 | 第25页 |
2.2 方法 | 第25-34页 |
2.2.1 农杆菌转化水稻基本方法 | 第25-26页 |
2.2.1.1 幼胚预培养 | 第25页 |
2.2.1.2 胚性愈伤组织的诱导 | 第25页 |
2.2.1.3 农杆菌预处理 | 第25页 |
2.2.1.4 幼胚转化 | 第25-26页 |
2.2.1.5 愈伤组织转化 | 第26页 |
2.2.1.6 抗性愈伤组织的选择 | 第26页 |
2.2.1.7 抗性愈伤组织的分化 | 第26页 |
2.2.1.8 生根和移苗 | 第26页 |
2.2.2 愈伤组织诱导条件和农杆菌转化体系的优化 | 第26-27页 |
2.2.2.1 2,4-D对愈伤组织诱导的影响 | 第26页 |
2.2.2.2 As对转化效率的影响 | 第26页 |
2.2.2.3 农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第26页 |
2.2.2.4 菌液浓度对转化效率的影响 | 第26页 |
2.2.2.5 受体材料对转化效率的影响 | 第26页 |
2.2.2.6 水稻基因型对转化效率的影响 | 第26-27页 |
2.2.2.7 激素配比对抗性愈伤组织分化的影响 | 第27页 |
2.2.2.8 干燥处理对抗性愈伤组织分化的影响 | 第27页 |
2.2.2.9 琼脂浓度对抗性愈伤组织分化的影响 | 第27页 |
2.2.2.10 高渗处理对抗性愈伤组织分化的影响 | 第27页 |
2.2.3 转基因水稻的检测 | 第27-34页 |
2.2.3.1 组织化学检测 | 第27-28页 |
2.2.3.2 PCR检测 | 第28-30页 |
2.2.3.2.1 质粒DNA的大量提取 | 第28-29页 |
2.2.3.2.2 植物总DNA的提取 | 第29页 |
2.2.3.2.3 PCR反应引物 | 第29页 |
2.2.3.2.4 PCR反应体系和条件 | 第29-30页 |
2.2.3.3 Southern Blot分析 | 第30-33页 |
2.2.3.3.1 质粒提取 | 第30页 |
2.2.3.3.2 植物总DNA提取 | 第30页 |
2.2.3.3.3 植物总DNA酶切、电泳和转膜 | 第30-32页 |
2.2.3.3.4 探针的制备 | 第32-33页 |
2.2.3.3.5 Southern Blot杂交 | 第33页 |
2.2.3.4 抗性检测 | 第33-34页 |
2.2.3.4.1 抗病性测定 | 第33页 |
2.2.3.4.2 抗虫性测定 | 第33-34页 |
3. 结果与分析 | 第34-52页 |
3.1 愈伤组织诱导 | 第34-36页 |
3.1.1 愈伤组织分型 | 第34页 |
3.1.2 2,4-D浓度对愈伤组织诱导的影响 | 第34-35页 |
3.1.3 培养基对愈伤组织诱导的影响 | 第35-36页 |
3.2 转化体系的优化 | 第36-38页 |
3.2.1 As对转化效率的影响 | 第36页 |
3.2.2 农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第36-37页 |
3.2.3 菌液浓度对转化效率的影响 | 第37页 |
3.2.4 转化受体对转化效率的影响 | 第37-38页 |
3.3 抗性愈伤组织的选择和再生 | 第38-41页 |
3.3.1 激素配比对抗性愈伤组织分化的影响 | 第38-39页 |
3.3.2 琼脂浓度对抗性愈伤组织分化的影响 | 第39-40页 |
3.3.3 干燥处理对抗性愈伤组织分化的影响 | 第40页 |
3.3.4 高渗处理对抗性愈伤组织分化的影响 | 第40-41页 |
3.3.5 多效唑对生根的影响 | 第41页 |
3.4 转基因TO代植株的检测 | 第41-50页 |
3.4.1 转基因植株的获得 | 第41页 |
3.4.2 Gus染色检测 | 第41-42页 |
3.4.3 PCR检测 | 第42页 |
3.4.4 Southern Blot分析 | 第42-50页 |
3.4.4.1 水稻总DNA的提取同3.4.3.1 | 第42-43页 |
3.4.4.2 限制性内切酶酶切位点的鉴定 | 第43-45页 |
3.4.4.3 水稻总DNA的酶切 | 第45页 |
3.4.4.4 探针的制备 | 第45-46页 |
3.4.4.5 Southern Blot杂交分析 | 第46-50页 |
3.4.4.5.1 Xa21转基因水稻植株的杂交 | 第46-48页 |
3.4.4.5.2 Bt转基因水稻植株的杂交 | 第48-50页 |
3.5 T1代Bt转基因水稻二化螟抗性的室内测定 | 第50页 |
3.6 T1代Xa21转基因植株分析 | 第50-52页 |
3.6.1 T1代Xa21转基因植株抗病性分析 | 第50-51页 |
3.6.2 T1代Xa21转基因植株的gus染色分析 | 第51-52页 |
4. 结论与讨论 | 第52-55页 |
4.1 水稻愈伤组织诱导和再生体系的优化 | 第52页 |
4.2 两种选择标记基因的应用 | 第52页 |
4.3 农杆菌介导水稻愈伤组织转化体系的优化 | 第52-53页 |
4.4 Gus基因的应用 | 第53页 |
4.5 外源基因的表达和遗传特点 | 第53-54页 |
4.6 多价转基因水稻转化的意义和存在的问题 | 第54-55页 |
5. 结论 | 第55-57页 |
参考文献 | 第57-65页 |
英文摘要 | 第65-67页 |
附录 | 第67-76页 |