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芪合酶基因转化番茄产生白藜芦醇的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-9页
1 前言第9-28页
 1.1 白藜芦醇的研究进展第9-16页
  1.1.1 白藜芦醇的发现及其在医药中的作用第9-10页
  1.1.2 白藜芦醇在酒中的浓度第10-11页
  1.1.3 白藜芦醇的化学结构及其生物活性第11-15页
   1.1.3.1 白藜芦醇的抗氧化活性第12-14页
   1.1.3.2 白藜芦醇的抗癌活性第14页
   1.1.3.3 白藜芦醇的神经保护活性第14-15页
   1.1.3.4 白藜芦醇的其它功能第15页
  1.1.4 芪合酶基因的研究进展第15-16页
 1.2 转基因番茄的研究进展第16-20页
  1.2.1 转基因抗病虫番茄的研究第16-18页
   1.2.1.1 转基因抗病毒番茄的研究第16-17页
   1.2.1.2 转基因抗真菌番茄的研究第17页
   1.2.1.3 转基因抗细菌番茄的研究第17页
   1.2.1.4 转基因抗虫番茄的研究第17-18页
  1.2.2 转基因抗除草剂番茄的研究第18页
  1.2.3 转基因抗逆番茄的研究第18页
  1.2.4 转基因延熟番茄的研究第18-19页
   1.2.4.1 抑制番茄细胞壁降解的研究第18-19页
   1.2.4.2 抑制番茄乙烯合成的研究第19页
  1.2.5 改进番茄品质的研究第19-20页
   1.2.5.1 提高番茄甜度的转基因研究第19-20页
   1.2.5.2 增加番茄类胡萝卜素含量的转基因研究第20页
   1.2.5.3 增加番茄固形物含量的转基因研究第20页
 1.3 转基因技术在作物品质改良中的应用第20-25页
  1.3.1 蛋白质改良第20-21页
   1.3.1.1 提高必需氨基酸含量第21页
   1.3.1.2 改善蛋白质的功能特性第21页
  1.3.2 油脂改良第21-23页
   1.3.2.1 提高植物油中主要脂肪酸第22页
   1.3.2.2 生产非常见的特殊脂肪酸第22-23页
  1.3.3 碳水化合物改良第23页
  1.3.4 水果和蔬菜品质改良第23-24页
   1.3.4.1 控制番茄成熟过程,提高其风味和货架期第23页
   1.3.4.2 改善番茄的加工性能和提高营养成分第23页
   1.3.4.3 提高马铃薯的加工性能第23-24页
  1.3.5 生产功能性食物因子和营养增补剂第24-25页
 1.4 转基因技术与常规育种手段的关系第25页
 1.5 本研究的目的和意义第25-27页
 1.6 技术路线第27-28页
2 材料与方法第28-43页
 2.1 材料与试剂第28-29页
  2.1.1 基因克隆与测序材料与试剂第28页
   2.1.1.1 植物材料第28页
   2.1.1.2 菌种及质粒第28页
   2.1.1.3 主要化学试剂第28页
  2.1.2 植物表达载体的构建材料与试剂第28页
   2.1.2.1 质粒和菌种第28页
   2.1.2.2 试剂第28页
  2.1.3 番茄遗传转化材料和试剂第28-29页
   2.1.3.1 植物材料第28页
   2.1.3.2 质粒和菌种第28页
   2.1.3.3 试剂第28页
   2.1.3.4 培养基第28-29页
  2.1.4 番茄遗传转化检测的材料第29页
   2.1.4.1 植物材料第29页
   2.1.4.2 主要生化试剂第29页
   2.1.4.3 主要溶液的配制第29页
 2.2 方法第29-43页
  2.2.1 芪合酶基因S2、S1的克隆与测序第29-35页
   2.2.1.1 葡萄基因组DNA的提取第29-30页
   2.2.1.2 PCR引物的设计与合成第30页
   2.2.1.3 PCR扩增第30-31页
   2.2.1.4 PCR扩增产物的回收第31页
   2.2.1.5 目的片段的克隆第31-35页
   2.2.1.6 DNA序列测定与分析第35页
  2.2.2 植物表达载体的构建第35-36页
   2.2.2.1 植物表达载体pBS2的构建第35-36页
   2.2.2.2 植物表达载体pEV2S1的构建第36页
  2.2.3 番茄的遗传转化方法第36-39页
   2.2.3.1 三亲交配第36-37页
   2.2.3.2 农杆菌双元载体中Mini-Ti质粒DNA的提取及PCR检测第37-38页
   2.2.3.3 LBA4404介导的番茄遗传转化第38-39页
  2.2.4 番茄转化植株的检测方法和白藜芦醇含量的分析方法第39-43页
   2.2.4.1 转化植株及对照植株PCR检测第39-40页
   2.2.4.2 Southern检测第40-42页
   2.2.4.3 芪合酶基因S2在转基因蕃茄植株中表达白藜芦醇的检测结果第42-43页
3 结果和分析第43-56页
 3.1 芪合酶基因S1、S2的克隆与测序第43-46页
  3.1.1 葡萄总DNA的提取第43页
  3.1.2 PCR扩增第43页
  3.1.3 目的片段的克隆第43页
  3.1.4 S2和S1基因的核酸和蛋白质序列分析第43-46页
 3.2 植物表达载体的构建第46-48页
  3.2.1 pBS2的构建与鉴定第46-47页
  3.2.2 pEV2S1的构建与鉴定第47-48页
  3.2.3 pBS2和pEV2S1导入LBA4404的PCR鉴定第48页
 3.3 番茄的遗传转化第48-52页
  3.3.1 番茄叶片出愈和分化的Kan梯度试验第48-49页
  3.3.2 番茄植株生根的Kan梯度试验第49页
  3.3.3 最佳侵染时间和AS浓度的确定第49-51页
  3.3.4 番茄转化植株盆栽第51-52页
 3.4 番茄遗传转化的分子检测及转基因植株中白藜芦醇含量的分析第52-56页
  3.4.1 PCR检测第52页
  3.4.2 Southern杂交第52-53页
  3.4.3 HPLC分析第53-56页
4 结论第56-57页
5 讨论第57-59页
 5.1 关于转化体的选择培养第57页
 5.2 关于转化受体的选择第57页
 5.3 关于转化中外植体的选择第57-58页
 5.4 关于果实特异性启动子第58-59页
6 参考文献第59-67页
7 缩写词第67-68页
8 致谢第68-69页
9 附录第69-73页

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