中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
1 前言 | 第9-28页 |
1.1 白藜芦醇的研究进展 | 第9-16页 |
1.1.1 白藜芦醇的发现及其在医药中的作用 | 第9-10页 |
1.1.2 白藜芦醇在酒中的浓度 | 第10-11页 |
1.1.3 白藜芦醇的化学结构及其生物活性 | 第11-15页 |
1.1.3.1 白藜芦醇的抗氧化活性 | 第12-14页 |
1.1.3.2 白藜芦醇的抗癌活性 | 第14页 |
1.1.3.3 白藜芦醇的神经保护活性 | 第14-15页 |
1.1.3.4 白藜芦醇的其它功能 | 第15页 |
1.1.4 芪合酶基因的研究进展 | 第15-16页 |
1.2 转基因番茄的研究进展 | 第16-20页 |
1.2.1 转基因抗病虫番茄的研究 | 第16-18页 |
1.2.1.1 转基因抗病毒番茄的研究 | 第16-17页 |
1.2.1.2 转基因抗真菌番茄的研究 | 第17页 |
1.2.1.3 转基因抗细菌番茄的研究 | 第17页 |
1.2.1.4 转基因抗虫番茄的研究 | 第17-18页 |
1.2.2 转基因抗除草剂番茄的研究 | 第18页 |
1.2.3 转基因抗逆番茄的研究 | 第18页 |
1.2.4 转基因延熟番茄的研究 | 第18-19页 |
1.2.4.1 抑制番茄细胞壁降解的研究 | 第18-19页 |
1.2.4.2 抑制番茄乙烯合成的研究 | 第19页 |
1.2.5 改进番茄品质的研究 | 第19-20页 |
1.2.5.1 提高番茄甜度的转基因研究 | 第19-20页 |
1.2.5.2 增加番茄类胡萝卜素含量的转基因研究 | 第20页 |
1.2.5.3 增加番茄固形物含量的转基因研究 | 第20页 |
1.3 转基因技术在作物品质改良中的应用 | 第20-25页 |
1.3.1 蛋白质改良 | 第20-21页 |
1.3.1.1 提高必需氨基酸含量 | 第21页 |
1.3.1.2 改善蛋白质的功能特性 | 第21页 |
1.3.2 油脂改良 | 第21-23页 |
1.3.2.1 提高植物油中主要脂肪酸 | 第22页 |
1.3.2.2 生产非常见的特殊脂肪酸 | 第22-23页 |
1.3.3 碳水化合物改良 | 第23页 |
1.3.4 水果和蔬菜品质改良 | 第23-24页 |
1.3.4.1 控制番茄成熟过程,提高其风味和货架期 | 第23页 |
1.3.4.2 改善番茄的加工性能和提高营养成分 | 第23页 |
1.3.4.3 提高马铃薯的加工性能 | 第23-24页 |
1.3.5 生产功能性食物因子和营养增补剂 | 第24-25页 |
1.4 转基因技术与常规育种手段的关系 | 第25页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
1.6 技术路线 | 第27-28页 |
2 材料与方法 | 第28-43页 |
2.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
2.1.1 基因克隆与测序材料与试剂 | 第28页 |
2.1.1.1 植物材料 | 第28页 |
2.1.1.2 菌种及质粒 | 第28页 |
2.1.1.3 主要化学试剂 | 第28页 |
2.1.2 植物表达载体的构建材料与试剂 | 第28页 |
2.1.2.1 质粒和菌种 | 第28页 |
2.1.2.2 试剂 | 第28页 |
2.1.3 番茄遗传转化材料和试剂 | 第28-29页 |
2.1.3.1 植物材料 | 第28页 |
2.1.3.2 质粒和菌种 | 第28页 |
2.1.3.3 试剂 | 第28页 |
2.1.3.4 培养基 | 第28-29页 |
2.1.4 番茄遗传转化检测的材料 | 第29页 |
2.1.4.1 植物材料 | 第29页 |
2.1.4.2 主要生化试剂 | 第29页 |
2.1.4.3 主要溶液的配制 | 第29页 |
2.2 方法 | 第29-43页 |
2.2.1 芪合酶基因S2、S1的克隆与测序 | 第29-35页 |
2.2.1.1 葡萄基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
2.2.1.2 PCR引物的设计与合成 | 第30页 |
2.2.1.3 PCR扩增 | 第30-31页 |
2.2.1.4 PCR扩增产物的回收 | 第31页 |
2.2.1.5 目的片段的克隆 | 第31-35页 |
2.2.1.6 DNA序列测定与分析 | 第35页 |
2.2.2 植物表达载体的构建 | 第35-36页 |
2.2.2.1 植物表达载体pBS2的构建 | 第35-36页 |
2.2.2.2 植物表达载体pEV2S1的构建 | 第36页 |
2.2.3 番茄的遗传转化方法 | 第36-39页 |
2.2.3.1 三亲交配 | 第36-37页 |
2.2.3.2 农杆菌双元载体中Mini-Ti质粒DNA的提取及PCR检测 | 第37-38页 |
2.2.3.3 LBA4404介导的番茄遗传转化 | 第38-39页 |
2.2.4 番茄转化植株的检测方法和白藜芦醇含量的分析方法 | 第39-43页 |
2.2.4.1 转化植株及对照植株PCR检测 | 第39-40页 |
2.2.4.2 Southern检测 | 第40-42页 |
2.2.4.3 芪合酶基因S2在转基因蕃茄植株中表达白藜芦醇的检测结果 | 第42-43页 |
3 结果和分析 | 第43-56页 |
3.1 芪合酶基因S1、S2的克隆与测序 | 第43-46页 |
3.1.1 葡萄总DNA的提取 | 第43页 |
3.1.2 PCR扩增 | 第43页 |
3.1.3 目的片段的克隆 | 第43页 |
3.1.4 S2和S1基因的核酸和蛋白质序列分析 | 第43-46页 |
3.2 植物表达载体的构建 | 第46-48页 |
3.2.1 pBS2的构建与鉴定 | 第46-47页 |
3.2.2 pEV2S1的构建与鉴定 | 第47-48页 |
3.2.3 pBS2和pEV2S1导入LBA4404的PCR鉴定 | 第48页 |
3.3 番茄的遗传转化 | 第48-52页 |
3.3.1 番茄叶片出愈和分化的Kan梯度试验 | 第48-49页 |
3.3.2 番茄植株生根的Kan梯度试验 | 第49页 |
3.3.3 最佳侵染时间和AS浓度的确定 | 第49-51页 |
3.3.4 番茄转化植株盆栽 | 第51-52页 |
3.4 番茄遗传转化的分子检测及转基因植株中白藜芦醇含量的分析 | 第52-56页 |
3.4.1 PCR检测 | 第52页 |
3.4.2 Southern杂交 | 第52-53页 |
3.4.3 HPLC分析 | 第53-56页 |
4 结论 | 第56-57页 |
5 讨论 | 第57-59页 |
5.1 关于转化体的选择培养 | 第57页 |
5.2 关于转化受体的选择 | 第57页 |
5.3 关于转化中外植体的选择 | 第57-58页 |
5.4 关于果实特异性启动子 | 第58-59页 |
6 参考文献 | 第59-67页 |
7 缩写词 | 第67-68页 |
8 致谢 | 第68-69页 |
9 附录 | 第69-73页 |