| 前言 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 第一部分 马内菲青霉菌种特DNA探针的筛选及具基因组组型的脉冲电泳分析 | 第11-42页 |
| 第一章 导论 | 第12-15页 |
| 第二章 马内菲青霉菌种特DNA探针的筛选 | 第15-35页 |
| 第一节 实验材料 | 第15-18页 |
| ·实验菌株 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·质粒 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·酶及试剂盒 | 第17页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第17页 |
| ·主要设备和仪器 | 第17-18页 |
| 第二节 实验方法 | 第18-21页 |
| ·马内菲青霉菌总DNA质粒库的构建 | 第18-19页 |
| ·马内菲青霉菌总DNA的提取 | 第18页 |
| (1) 菌体的培养与收集 | 第18页 |
| (2) DNA的提取 | 第18页 |
| ·质粒PUC118DNA的提取 | 第18-19页 |
| ·质粒PUC118与马内菲青霉菌总DNA进行重组 | 第19页 |
| (1) 马内菲青霉菌总DNA及PUC118DNA的酶切 | 第19页 |
| (2) 酶切质粒去磷酸化 | 第19页 |
| (3) 酶切产物的连接反应 | 第19页 |
| ·重组质粒的转化 | 第19页 |
| (1) 大肠杆菌TGI感受的制备 | 第19页 |
| (2) 重组质粒转入大肠杆菌 | 第19页 |
| ·含重组质粒菌落的筛选 | 第19页 |
| ·从马内菲青霉菌总DNA质粒库(部分)中筛选特异探针 | 第19-21页 |
| ·马内菲青霉菌总DNA质粒库的杂交分析 | 第20页 |
| (1) 菌落原位杂交膜的制备 | 第20页 |
| (2) 马内菲青霉菌总DNA探针的标记 | 第20页 |
| (3) 杂交反应与自显影 | 第20页 |
| ·以曲霉菌总DNA为探针进行特异探针的初筛 | 第20-21页 |
| (1) 菌落原位杂交 | 第20页 |
| (2) 点杂交 | 第20页 |
| (3) Southern印迹杂交 | 第20-21页 |
| ·初选探针特异性的证实 | 第21页 |
| (1) 检测菌株DNA的制备 | 第21页 |
| (2) 点杂交膜的制备及杂交反应 | 第21页 |
| ·特异探针的初步酶切分析 | 第21页 |
| ·含特异探针细菌菌株的保存 | 第21页 |
| 第三节 实验结果 | 第21-30页 |
| ·马内菲青霉菌总DNA的提取及酶切 | 第21-22页 |
| ·质粒PUC118DNA的提取及酶切 | 第22页 |
| ·质粒PUC118的重组及转化 | 第22页 |
| ·马内菲青霉菌总DNA质粒库的杂交分析 | 第22-23页 |
| ·特异探针的初筛 | 第23-27页 |
| ·菌落原位杂交结果 | 第23-24页 |
| ·点杂交结果 | 第24-25页 |
| ·Southern印迹杂交结果 | 第25-27页 |
| ·初选探针特异性鉴定结果 | 第27-29页 |
| ·特异探针的酶切分析结果 | 第29-30页 |
| 第四节 讨论 | 第30-35页 |
| ·特异性DNA探针筛选的策略 | 第30-31页 |
| ·真菌DNA提取方法的改良 | 第31-32页 |
| ·质粒栽体的选择与重组 | 第32页 |
| ·重组质粒的转化与鉴定 | 第32-33页 |
| ·不同杂交技术在本研究中的应用意义 | 第33页 |
| ·研究展望 | 第33-35页 |
| 第三章 马内菲青霉菌基因组型的脉冲电泳分析初探 | 第35-39页 |
| 第一节 实验材料 | 第35页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 第二节 实验方法 | 第35-36页 |
| ·真菌的培养 | 第35页 |
| ·全染色体DNA的制备 | 第35页 |
| ·PFGE分离染色体DNA | 第35-36页 |
| 第三节 实验结果 | 第36-37页 |
| 第四节 讨论 | 第37-39页 |
| ·全染色体DNA的制备 | 第37页 |
| ·包块内DNA含量的控制 | 第37页 |
| ·电泳参数的选择 | 第37-38页 |
| ·染色体大小的确定 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 第二部分 白念珠菌特异探针Ca3的应用研究 | 第42-58页 |
| 第一章 导论 | 第43-46页 |
| 第二章 白念珠菌特异探针Ca3的应用研究 | 第46-56页 |
| 第一节 实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·酶及试剂盒 | 第47页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第47页 |
| ·主要设备和仪器 | 第47页 |
| 第二节 实验方法 | 第47-50页 |
| ·白念珠菌总DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·菌细胞的培养与收集 | 第47页 |
| ·DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·用EcoRI消化白念珠菌总DNA | 第48页 |
| ·酶切产物电泳分离 | 第48页 |
| ·将凝胶中的DNA进行Southern转移 | 第48-49页 |
| ·对凝胶中的DNA进行变性 | 第48页 |
| ·建立Southern转移 | 第48-49页 |
| ·将DNA固定在尼龙膜上 | 第49页 |
| ·用Ca3探针进行杂交反应 | 第49页 |
| ·从入噬菌体中提取Ca3DNA探针 | 第49页 |
| ·杂交反应 | 第49页 |
| ·遗传关系图的构建 | 第49-50页 |
| 第三节 实验结果 | 第50-54页 |
| ·白念珠菌总DNA的酶切 | 第50页 |
| ·Ca3探针杂交结果 | 第50-53页 |
| ·遗传关系图的构建 | 第53-54页 |
| 第四节 讨论 | 第54-56页 |
| ·Southern杂交技术中存在的若干问题 | 第54-55页 |
| ·Ca3图谱的识别与分析 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 全文小结 | 第58-59页 |
| 代结束语 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 课题综述 | 第61-64页 |
| 附录 攻读博士学位期间发表的文章 | 第64-65页 |
| 图片索引 | 第65页 |
