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胃癌单克隆抗体及其免疫交联物的内化研究

摘要第1-22页
第1章 引言第22-25页
第2章 胃癌单克隆抗体识别的胃癌相关抗原的超微结构定位研究第25-48页
     ·前言第25-26页
     ·材料与方法第26-30页
       ·胃癌MAb的纯化与鉴定第26页
       ·细胞培养第26页
       ·移植瘤动物模型及人胃癌实体瘤第26页
       ·冰冻超薄切片第26-28页
       ·羊抗鼠胶体金探针的制备第28页
       ·胃癌相关抗原的电镜免疫标记定位第28-30页
     ·结果第30-32页
       ·胃癌MAb提取物纯度鉴定结果第30页
       ·胃癌相关抗原在SGC—7901细胞中的定位结果第30-31页
       ·胃癌相关抗原在KATOⅢ细胞中的定位结果第31页
       ·胃癌相关抗原在人胃癌实体瘤细胞中的定位结果第31页
       ·对照实验结果第31-32页
     ·讨论第32-35页
       ·关于MGb_2识别的胃癌相关抗原的合成转运问题第32-33页
       ·关于MGb_2识别的胃癌相关抗原胞内再循环池问题第33-34页
       ·结语第34-35页
     ·Figures第35-48页
第3章 胃癌单克隆抗体的内化研究第48-145页
     ·前言第48-49页
     ·材料与方法第49-59页
       ·胃癌MAb及细胞系第49页
       ·胶体金的制备第49页
       ·胶体金的鉴定第49-50页
       ·胶体金颗粒数目的推导测算第50页
       ·胃癌MAb的荧光素标记第50页
       ·胃癌MAb的辣根过氧化物酶标记第50-51页
       ·胃癌MAb的~(125)I标记第51页
       ·转铁蛋白的HRP标记第51页
       ·胃癌MAb的cAu标记第51-52页
         ·胃癌MAb及无关MAb C_4与cAu的结合第51-52页
         ·FITC—MAb—cAu双标志探针的制备第52页
       ·cAu标记胃癌MAb的结合率及稳定性测定第52页
       ·MAb—cAu标记物中cAu携带MAb分子数目的理论测算第52-53页
       ·不同抗原结合价的MAb—cAu的制备第53-54页
       ·其它cAu探针的制备第54页
       ·胃癌MAb内化追踪实验第54-59页
         ·荧光素标记示踪法第54-55页
         ·胃癌MAb内化超微形态学及动力学过程的确定第55-56页
         ·pH值对MGb_2—cAu—抗原复合物稳定性的影响第56页
         ·MGb_2-cAu连续标记的内化示踪第56页
         ·细胞松驰素B、秋水仙素对MGb_2—cAu内化的影响第56-57页
         ·不同抗原结合价的MGb_2—cAu内化结果比较第57页
         ·Tf—HRP、Tf—cAu18的内化示踪第57页
         ·cAu直接标记法示踪胃癌MAb内化的可行性验证第57-59页
       ·a.MAb—HRP法第57页
       ·b.同位素、胶体金双标示踪第57-59页
       ·c.包埋前免疫电镜标记法第59页
     ·结果第59-71页
       ·cAu及胃癌MAb—cAu的电镜鉴定结果第59页
       ·胃癌MAb与cAu的标记结合率及结合物的稳定性测定结果第59页
       ·FITC标记法示踪胃癌MAb的内化结果第59-61页
         ·靶细胞表面荧光分布第60页
         ·靶细胞胞内的荧光分布第60-61页
       ·a.SGC—7901细胞第60页
       ·b.KATOⅢ细胞第60-61页
         ·荧光定位的超微形态结构第61页
       ·胃癌MAb内化的超微形态学动态观察结果第61-69页
         ·MGb_2—cAu在SGC—7901细胞中的内化结果第61-68页
       ·a.MGb_2—cAu的靶细胞表面结合分布第61-62页
       ·b.MGb_2-cAu进入靶细胞的途径第62-63页
       ·c.MGb_2-cAu进入靶细胞后的胞内转运过程第63-66页
       ·d.MGb_2-cAu内化后的归宿第66-67页
       ·e.cAu颗粒大小对内化的影响第67页
       ·f.MGb_2—cAu入胞途径结构与细胞固有液相胞饮途径结构的对比观察结果第67-68页
         ·MAb—cAu在KATOⅢ细胞中的内化结果第68页
         ·对照实验结果第68-69页
       ·pH值对MGb_2—cAu—抗原复合物稳定性影响的测定结果第69页
       ·MGb_2—cAu连续标记的内化结果第69页
       ·细胞松驰素B、秋水仙素对MGb_2—cAu内化影响的观察结果第69页
       ·不同抗原结合价的MGb_2—cAu的内化结果第69-70页
       ·Tf—HRP与Tf—cAu18的内化结果第70页
       ·其它示踪方法的结果第70-71页
         ·MGb_2-HRP的内化结果第70-71页
         ·同位素、胶体金双标示踪结果第71页
         ·包埋前免疫电镜标记结果第71页
     ·讨论第71-91页
       ·关于胃癌MAb的内化途径问题第71-78页
         ·可能的进入途径及有关定义的初探第71-73页
         ·不同进入途径的意义第73-75页
         ·吸附内化与液相胞饮之间的关系—膜胞饮功能区依赖性假说第75-78页
       ·关于胃癌MAb内化后的胞内转运问题第78-83页
         ·MAb转运中间介导体的形成第78-80页
         ·MAb胞内转运过程中的若干重要事件第80-83页
       ·关于胞内抗原再循环池在胃癌MAb内化中的作用问题第83-84页
       ·胃癌MAb内化模式图第84页
       ·胃癌MAb不同内化特性的意义第84-85页
       ·胃癌MAb内化与细胞骨架成分之间的关系第85-86页
       ·关于胃癌MAb内化示踪的方法学问题第86-91页
         ·内化示踪方法学概要第86-87页
         ·关于本研究内化示踪方法的可靠性论证第87-88页
         ·关于Tf—HRP及Tf—cAu内化结果相悖的解析及MAb—cAu抗原结合价问题第88-90页
         ·关于FITC—MAb—cAu双标志探针第90-91页
     ·Figures第91-145页
第4章 胃癌单克隆抗体免疫交联物的内化研究第145-193页
     ·前言第145-146页
     ·材料与方法第146-153页
       ·胃癌MAb及细胞系第146页
       ·胃癌MAb免疫交联物的制备第146-148页
         ·RTA免疫交联物的制备第146-147页
         ·TCS免疫交联物的制备第147页
         ·DM免疫交联物的制备第147-148页
         ·MTX免疫交联物的制备第148页
         ·~(125)I免疫交联物的制备第148页
       ·胃癌MAb免疫交联物与cAu的结合第148-149页
       ·胃癌MAb免疫交联物在SGC—7901细胞中的内化示踪第149-151页
         ·MGb_2-RTA的内化示踪第149页
         ·MGb_2—TCS的内化示踪第149-150页
         ·MGb_2—DM的内化示踪第150页
         ·MGb_2-MTX的内化示踪第150页
         ·~(125)I—MGb_2的内化示踪第150-151页
         ·~(125)I—MGb_2—MTX双“弹头”免疫交联物的内化示踪第151页
       ·免疫交联物Cocktail在人胃癌实体瘤细胞中的内化示踪第151页
       ·胃癌MAb免疫交联物在荷人胃癌的裸鼠体内示踪第151-153页
         ·~(125)5I—MGb_2的体内示踪第151-152页
         ·MGb_2—MTX的体内示踪第152-153页
     ·结果第153-158页
       ·MGb_2-RTA在SGC—7901细胞中的内化结果第153-155页
         ·MGb_2-RTA的靶细胞表面标记第153-154页
         ·MGb_2—RTA的入胞途径及细胞内转运第154-155页
         ·对照实验结果第155页
       ·MGb_2-TCS在SGC—7901细胞中的内化结果第155页
       ·MGb_2-DM在SGC—7901细胞中的内化结果第155-156页
       ·MGb_2-MTX在SGC—7901细胞中的内化结果第156页
       ·~(125)I—MGb_2在SGC—2901细胞中的内化结果第156-157页
       ·~(125)I—MGb_2-MTX在SGC—7901细胞中的内化结果第157页
       ·免疫交联物Cocktail在人胃癌实体瘤细胞中的内化结果第157页
       ·免疫交联物的体内示踪结果第157-158页
         ·~(125)I—MGb_2的体内示踪结果第157页
         ·MGb_2—MTX的体内示踪结果第157-158页
     ·讨论第158-167页
       ·关于MGb_2-RTA的胞内转运及其意义第158-160页
       ·关于MGb_2-TCS的内化问题第160-161页
       ·关于免疫药物的内化问题第161-163页
       ·关于免疫~(125)I的导向治疗问题第163-165页
       ·内化研究在遴选免疫交联物Cocktail方案中的重要性第165页
       ·关于免疫交联物的体内定位问题第165-166页
       ·结语第166-167页
     ·Figures第167-193页
第5章 小结第193-196页
Literature Cited第196-211页
List of Abbreviations第211-213页
Abstract第213-217页
Acknowledgements第217页

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