致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
1 文献综述 | 第10-20页 |
·DNA 甲基化及其特点 | 第10页 |
·DNA 甲基化的生物学意义 | 第10-13页 |
·保护本身基因组免遭破坏 | 第10-11页 |
·为植物正常生长发育所必需 | 第11页 |
·与植物的春化作用及开花有关 | 第11页 |
·DNA 甲基化与转基因植株的基因沉默 | 第11-12页 |
·可调节植物内源基因的表达 | 第12页 |
·DNA 甲基化与杂种优势 | 第12-13页 |
·DNA 甲基化与植物组织培养及体细胞无性系变异 | 第13页 |
·DNA 甲基化模式产生及维持机制 | 第13-17页 |
·DNA 甲基化的模式 | 第13-15页 |
·DNA 甲基转移酶或DNA 甲基化酶 | 第13-14页 |
·去甲基化作用 | 第14页 |
·De novo 甲基化信号 | 第14-15页 |
·DNA 甲基化抑制基因转录的机理 | 第15页 |
·甲基化引起转录抑制的假说 | 第15页 |
·MBD 与转录抑制 | 第15页 |
·DNA 甲基化调控基因转录的方式 | 第15-17页 |
·DNA 甲基化与植物转座子活性 | 第15-16页 |
·DNA 甲基化与DNA 甲基化不足 | 第16页 |
·DNA 甲基化酶基因对反义转化植物的调控 | 第16-17页 |
·DNA 甲基化研究方法 | 第17-20页 |
·DNA 甲基化特异性分析 | 第17-18页 |
·基于重亚硫酸盐处理的DNA 甲基化的分析技术 | 第17页 |
·不依赖重亚硫酸盐处理的DNA 甲基化的分析技术 | 第17-18页 |
·DNA 甲基化非特异性分析 | 第18页 |
·DNA 甲基化相关基因的筛选及新的甲基化位点寻找技术 | 第18-20页 |
2 引言 | 第20-24页 |
·立题依据 | 第20-21页 |
·研究思路 | 第21-22页 |
·技术路线 | 第22-24页 |
3 材料与方法 | 第24-41页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中DNA甲基化和组蛋白修饰相关基因的表达分析 | 第24-33页 |
·实验系统和试剂 | 第24-27页 |
·Affymetrix GeneChip?系统 | 第24页 |
·试剂(Miscellaneous Reagent) | 第24页 |
·试剂配制 | 第24-27页 |
·材料制备 | 第27页 |
·Affymetrix 表达谱芯片实验操作 | 第27-33页 |
·总RNA 的提取和纯化 | 第27-29页 |
·cDNA 的合成和纯化 | 第29-30页 |
·cRNA 的合成和纯化 | 第30-31页 |
·cRNA 片段化、配制杂交液 | 第31-32页 |
·芯片杂交 | 第32页 |
·洗脱芯片 | 第32页 |
·扫描芯片 | 第32-33页 |
·数据分析 | 第33页 |
·成熟胚脱分化过程DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因的确认 | 第33页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点5-甲基胞嘧啶的百分含量 | 第33-35页 |
·材料准备 | 第33页 |
·DNA 进行提取、纯度检测 | 第33-35页 |
·基因组DNA 甲基化水平测定 | 第35页 |
·小麦成熟胚脱分化过程的MSAP 分析 | 第35-41页 |
·实验材料 | 第35页 |
·主要实验试剂 | 第35页 |
·实验方法 | 第35-37页 |
·DNA 扩增反应 | 第37-39页 |
·选择性扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第39-40页 |
·溶液的配制 | 第39页 |
·制胶 | 第39页 |
·电泳 | 第39-40页 |
·固定、银染、显色 | 第40页 |
·多态性带的回收,测序及序列分析 | 第40-41页 |
4 结果与分析 | 第41-50页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中DNA 甲基化相关基因分析 | 第41-45页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因 | 第41-42页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因表达数目变化 | 第42-43页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因表达强度变化 | 第43-45页 |
·小麦成熟胚脱分化和发芽过程的不同时点5-甲基胞嘧啶的百分含量 | 第45-46页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中的MSAP 分析 | 第46-50页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中的预扩增结果 | 第46页 |
·小麦成熟胚脱分化过程中的选择性扩增结果 | 第46-48页 |
·多态性带的回收,测序及序列分析 | 第48-50页 |
5 讨论 | 第50-53页 |
·利用基因芯片技术研究了小麦成熟胚脱分化过程中基因表达的变化情况,确定了脱分化过程的一些重要基因 | 第50-51页 |
·HPLC 法测定小麦成熟胚脱分化和发芽过程的5-甲基胞嘧啶的百分含量 | 第51-52页 |
·MSAP 是一种较为有效的检测DNA 甲基化的方法 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-60页 |
ABSTRACT | 第60-62页 |
附录 | 第62页 |