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小麦成熟胚脱分化过程的DNA甲基化研究

致谢第1-8页
摘要第8-10页
1 文献综述第10-20页
   ·DNA 甲基化及其特点第10页
   ·DNA 甲基化的生物学意义第10-13页
     ·保护本身基因组免遭破坏第10-11页
     ·为植物正常生长发育所必需第11页
     ·与植物的春化作用及开花有关第11页
     ·DNA 甲基化与转基因植株的基因沉默第11-12页
     ·可调节植物内源基因的表达第12页
     ·DNA 甲基化与杂种优势第12-13页
     ·DNA 甲基化与植物组织培养及体细胞无性系变异第13页
   ·DNA 甲基化模式产生及维持机制第13-17页
     ·DNA 甲基化的模式第13-15页
       ·DNA 甲基转移酶或DNA 甲基化酶第13-14页
       ·去甲基化作用第14页
       ·De novo 甲基化信号第14-15页
     ·DNA 甲基化抑制基因转录的机理第15页
       ·甲基化引起转录抑制的假说第15页
       ·MBD 与转录抑制第15页
     ·DNA 甲基化调控基因转录的方式第15-17页
       ·DNA 甲基化与植物转座子活性第15-16页
       ·DNA 甲基化与DNA 甲基化不足第16页
       ·DNA 甲基化酶基因对反义转化植物的调控第16-17页
   ·DNA 甲基化研究方法第17-20页
     ·DNA 甲基化特异性分析第17-18页
       ·基于重亚硫酸盐处理的DNA 甲基化的分析技术第17页
       ·不依赖重亚硫酸盐处理的DNA 甲基化的分析技术第17-18页
     ·DNA 甲基化非特异性分析第18页
     ·DNA 甲基化相关基因的筛选及新的甲基化位点寻找技术第18-20页
2 引言第20-24页
   ·立题依据第20-21页
   ·研究思路第21-22页
   ·技术路线第22-24页
3 材料与方法第24-41页
   ·小麦成熟胚脱分化过程中DNA甲基化和组蛋白修饰相关基因的表达分析第24-33页
     ·实验系统和试剂第24-27页
       ·Affymetrix GeneChip?系统第24页
       ·试剂(Miscellaneous Reagent)第24页
       ·试剂配制第24-27页
     ·材料制备第27页
     ·Affymetrix 表达谱芯片实验操作第27-33页
       ·总RNA 的提取和纯化第27-29页
       ·cDNA 的合成和纯化第29-30页
       ·cRNA 的合成和纯化第30-31页
       ·cRNA 片段化、配制杂交液第31-32页
       ·芯片杂交第32页
       ·洗脱芯片第32页
       ·扫描芯片第32-33页
       ·数据分析第33页
       ·成熟胚脱分化过程DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因的确认第33页
   ·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点5-甲基胞嘧啶的百分含量第33-35页
     ·材料准备第33页
     ·DNA 进行提取、纯度检测第33-35页
     ·基因组DNA 甲基化水平测定第35页
   ·小麦成熟胚脱分化过程的MSAP 分析第35-41页
     ·实验材料第35页
     ·主要实验试剂第35页
     ·实验方法第35-37页
     ·DNA 扩增反应第37-39页
     ·选择性扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测第39-40页
       ·溶液的配制第39页
       ·制胶第39页
       ·电泳第39-40页
       ·固定、银染、显色第40页
     ·多态性带的回收,测序及序列分析第40-41页
4 结果与分析第41-50页
   ·小麦成熟胚脱分化过程中DNA 甲基化相关基因分析第41-45页
     ·小麦成熟胚脱分化过程中DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因第41-42页
     ·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因表达数目变化第42-43页
     ·小麦成熟胚脱分化过程中不同时点DNA 甲基化和组蛋白修饰相关基因表达强度变化第43-45页
   ·小麦成熟胚脱分化和发芽过程的不同时点5-甲基胞嘧啶的百分含量第45-46页
   ·小麦成熟胚脱分化过程中的MSAP 分析第46-50页
     ·小麦成熟胚脱分化过程中的预扩增结果第46页
     ·小麦成熟胚脱分化过程中的选择性扩增结果第46-48页
     ·多态性带的回收,测序及序列分析第48-50页
5 讨论第50-53页
   ·利用基因芯片技术研究了小麦成熟胚脱分化过程中基因表达的变化情况,确定了脱分化过程的一些重要基因第50-51页
   ·HPLC 法测定小麦成熟胚脱分化和发芽过程的5-甲基胞嘧啶的百分含量第51-52页
   ·MSAP 是一种较为有效的检测DNA 甲基化的方法第52-53页
参考文献第53-60页
ABSTRACT第60-62页
附录第62页

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