| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-41页 |
| ·手性药物概述 | 第13-14页 |
| ·手性药物的药理立体选择性 | 第13页 |
| ·手性药物制剂的市场发展 | 第13-14页 |
| ·手性醇在制药领域的应用及其合成 | 第14-16页 |
| ·手性醇在制药领域的应用 | 第14页 |
| ·生产手性醇的方法 | 第14-16页 |
| ·微生物法不对称还原合成手性醇 | 第16-21页 |
| ·微生物转化在手性药物合成中的应用 | 第16页 |
| ·微生物不对称还原的特点 | 第16-18页 |
| ·应用于不对称还原的微生物种类 | 第18-19页 |
| ·控制反应立体选择性的主要方法 | 第19-20页 |
| ·提高反应体系中底物转化量的方法 | 第20-21页 |
| ·酶法不对称还原合成手性醇 | 第21-26页 |
| ·应用于不对称还原的氧化还原酶 | 第21页 |
| ·酶不对称还原羰基化合物的机理 | 第21-24页 |
| ·氧化还原酶的分离纯化 | 第24-26页 |
| ·还原体系中的辅酶再生 | 第26-30页 |
| ·化学法 | 第26页 |
| ·电化学法 | 第26-27页 |
| ·光化学法 | 第27页 |
| ·生物法 | 第27-30页 |
| ·本课题的研究思路和主要内容 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-41页 |
| 第二章 酵母细胞不对称还原2’-氯-苯乙酮 | 第41-59页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·菌种与培养基 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·主要实验仪器 | 第43页 |
| ·静息细胞的制备 | 第43页 |
| ·不对称还原反应 | 第43-44页 |
| ·产物分析 | 第44页 |
| ·数据处理 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-56页 |
| ·酵母菌的筛选 | 第45页 |
| ·反应体系中乙醇含量对产率的影响 | 第45-46页 |
| ·不同水-有机溶剂双相反应体系中酵母还原2’-氯-苯乙酮的比较 | 第46-49页 |
| ·添加不同的辅助底物对反应的影响 | 第49-50页 |
| ·底物浓度和外加消旋产物对反应的影响 | 第50-52页 |
| ·酵母细胞还原2’-氯苯乙酮的过程曲线 | 第52-53页 |
| ·细胞用量对还原反应的影响 | 第53-54页 |
| ·酵母细胞的重复利用 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第三章 酵母Candida pseudotropicalis 104羰基还原酶的分离纯化 | 第59-73页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料与方法 | 第59-62页 |
| ·菌种与培养条件 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·主要实验仪器 | 第60页 |
| ·羰基还原酶的分离纯化 | 第60-61页 |
| ·纯化产物的分析 | 第61页 |
| ·酶活及蛋白含量的测定 | 第61-62页 |
| ·不对称还原及产物分析 | 第62页 |
| ·数据处理 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-71页 |
| ·羰基还原酶(CAR)的分布位置及辅酶依赖性的确定 | 第62-63页 |
| ·DEAE阴离子交换层析 | 第63-67页 |
| ·Blue Sepharose 6 FF亲和层析 | 第67-68页 |
| ·羰基还原酶的纯化结果 | 第68-69页 |
| ·羰基还原酶不对称催化还原2’-氯-苯乙酮及产物分析 | 第69页 |
| ·羰基还原酶肽质量图谱分析结果 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 羰基还原酶酶学性质的研究 | 第73-89页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-78页 |
| ·菌种与培养条件 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·主要实验仪器 | 第73-74页 |
| ·羰基还原酶的制备 | 第74页 |
| ·酶活的测定 | 第74页 |
| ·酶反应的最适温度及温度稳定性的测定 | 第74页 |
| ·酶反应的最适pH及pH稳定性 | 第74-75页 |
| ·金属离子对酶反应的影响 | 第75页 |
| ·酶反应的底物特异性 | 第75页 |
| ·不对称催化过程 | 第75页 |
| ·产物构型分析 | 第75-78页 |
| ·数据处理 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-86页 |
| ·羰基还原酶催化反应的可逆性 | 第78-79页 |
| ·羰基还原酶的最适催化温度及温度稳定性 | 第79-80页 |
| ·羰基还原酶催化反应的最适pH及pH稳定性 | 第80-82页 |
| ·金属离子及EDTA对羰基还原酶酶活的影响 | 第82-83页 |
| ·羰基还原酶的底物专一性 | 第83-84页 |
| ·羰基还原酶与酵母全细胞对部分芳香酮还原的立体选择性比较 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 第五章 羰基还原酶基因的克隆与表达 | 第89-109页 |
| ·引言 | 第89页 |
| ·材料与方法 | 第89-98页 |
| ·菌种、质粒与培养条件 | 第89-91页 |
| ·酶与化学试剂 | 第91-92页 |
| ·主要实验仪器 | 第92页 |
| ·羰基还原酶基因的克隆与表达质粒的构建 | 第92-96页 |
| ·重组大肠杆菌的培养及酶蛋白的表达 | 第96页 |
| ·酶活及蛋白含量的测定 | 第96-97页 |
| ·重组羰基还原酶的纯化及分析 | 第97页 |
| ·不对称还原及产物分析 | 第97页 |
| ·数据处理 | 第97-98页 |
| ·结果与讨论 | 第98-106页 |
| ·CAR基因克隆与表达质粒构建结果 | 第98-101页 |
| ·不同的重组菌与原始酵母C.104表达活力的比较 | 第101-102页 |
| ·重组CAR的纯化 | 第102-103页 |
| ·表达温度及时间对CAR的表达及活力的影响 | 第103-104页 |
| ·诱导剂IPTG的浓度对CAR表达及活力的影响 | 第104-105页 |
| ·诱导时间对CAR表达及活力的影响 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 第六章 重组羰基还原酶不对称还原2’-氯-苯乙酮 | 第109-127页 |
| ·引言 | 第109页 |
| ·材料与方法 | 第109-111页 |
| ·菌株与培养条件 | 第109-110页 |
| ·试剂 | 第110页 |
| ·实验仪器 | 第110页 |
| ·酶活的测定 | 第110页 |
| ·重组菌的培养及粗酶液的制备 | 第110页 |
| ·不对称还原反应体系 | 第110-111页 |
| ·产物分析 | 第111页 |
| ·数据处理 | 第111页 |
| ·结果与讨论 | 第111-123页 |
| ·不同共底物对重组菌细胞催化转化2’-氯-苯乙酮产率的影响 | 第111-114页 |
| ·重组菌全细胞与粗酶液体系中还原2’-氯-苯乙酮的结果 | 第114-115页 |
| ·异丙醇与仲丁醇含量对还原反应的影响 | 第115-116页 |
| ·反应体系中NADH/NAD+的含量对还原产率的影响 | 第116-117页 |
| ·反应体系中最适pH的确定 | 第117-118页 |
| ·温度对重组CAR还原2’-氯-苯乙酮的影响 | 第118-119页 |
| ·底物浓度对还原反应的影响 | 第119-120页 |
| ·CAR的用量对还原反应的影响 | 第120-121页 |
| ·重组CAR不对称催化氧化还原反应动力学性质 | 第121-123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第七章 结论和展望 | 第127-131页 |
| ·结论 | 第127-129页 |
| ·建议和展望 | 第129-131页 |
| 攻读博士学位期间主要成果 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
