| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-31页 |
| 第一章 干扰素研究进展 | 第11-23页 |
| 一、干扰素的种类和结构 | 第11-13页 |
| 二、干扰素生物学特点 | 第13-18页 |
| 三、禽类干扰素研究进展 | 第18-20页 |
| 四、兽医领域基因工程干扰素的应用研究 | 第20-23页 |
| 第二章 佐剂及遗传佐剂研究进展 | 第23-31页 |
| 一、协同刺激分子(共刺激分子)佐剂 | 第24页 |
| 二、CpG DNA序列和脂质体 | 第24-25页 |
| 三、细胞因子佐剂 | 第25-29页 |
| 四、影响遗传佐剂效果的其他因素 | 第29-31页 |
| 第二部分 实验研究 | 第31-111页 |
| 第三章 四川麻鸭α干扰素基因的克隆及序列分析 | 第31-53页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| ·麻鸭 | 第31页 |
| ·酶及试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-38页 |
| ·SDIFN-αORF基因的克隆 | 第33-37页 |
| ·目的基因的序列测定与分析 | 第37-38页 |
| 3.结果与分析 | 第38-49页 |
| ·PCR扩增产物 | 第38页 |
| ·nest-PCR扩增产物 | 第38-39页 |
| ·PCR和nest-PCR产物比较 | 第39页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定结果 | 第40页 |
| ·IFN-α序列 | 第40-42页 |
| ·序列分析 | 第42-44页 |
| ·糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点分析 | 第44-45页 |
| ·信号肽预测 | 第45-47页 |
| ·疏水性分析 | 第47页 |
| ·跨膜区和高级结构分析 | 第47-48页 |
| ·同源性分析和进化比较 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-52页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·基因扩增 | 第49-50页 |
| ·T载体克隆 | 第50页 |
| ·生物信息学分析 | 第50-52页 |
| 5、小结 | 第52-53页 |
| 第四章 鸭α干扰素基因原核表达载体构建及其表达产物的抗病毒活性 | 第53-71页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-62页 |
| ·四川麻鸭IFN-α原核表达质粒的构建技术路线 | 第54-55页 |
| ·SDIFN-α原核表达质粒的构建 | 第55-58页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第58-59页 |
| ·pBV220-SDIFN-α原核表达菌株的初步表达 | 第59页 |
| ·鸭α-IFN包涵体纯化及复性 | 第59-60页 |
| ·采用细胞病变抑制法(DEF/VSV系统)初步测定干扰素抗病毒活性 | 第60页 |
| ·FQ-PCR检测干扰素抗病毒活性 | 第60-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·菌株PCR扩增鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·pBV220-SDIFN-α质粒酶切鉴定结果 | 第63页 |
| ·pBV220-SDIFN-α序列测定 | 第63-64页 |
| ·pBV220-SDIFN-α的原核表达情况 | 第64页 |
| ·表达产物抗病毒活性 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·关于表达系统及表达质粒的选择 | 第66-67页 |
| ·关于感受态细胞的制备与转化 | 第67-68页 |
| ·关于重组质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·关于基因表达 | 第68-69页 |
| ·关于表达产物抗病毒活性测定 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 四川麻鸭α干扰素基因(SDIFN-α)真核表达载体构建 | 第71-79页 |
| 1 实验材料 | 第71页 |
| 2 实验方法 | 第71-75页 |
| ·四川麻鸭IFN-α真核表达质粒的构建 | 第71-74页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α真核表达质粒的单双酶切鉴定 | 第74-75页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α真核表达质粒序列测定 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-77页 |
| ·四川麻鸭IFN-α基因的获取 | 第75页 |
| ·pUC-SDIFN-α酶切鉴定结果 | 第75-76页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α酶切鉴定结果 | 第76页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α序列测定 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| ·构建SDIFN-α的真核表达重组体的意义 | 第77页 |
| ·四川麻鸭IFN-α的真核表达载体的克隆 | 第77-78页 |
| 5、小结 | 第78-79页 |
| 第六章 免疫组织化学检测鸭α干扰素方法的建立及鸭α干扰素真核表达质粒在免疫鸭体内的表达规律研究 | 第79-97页 |
| 1 实验材料 | 第79-81页 |
| 2、实验方法 | 第81-88页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-SDIFN-α的大量提取 | 第81-82页 |
| ·质粒的纯化 | 第82页 |
| ·含pcDNA-SDIFN-α的基因枪子弹的制备 | 第82页 |
| ·实验鸭免疫分组设计 | 第82-83页 |
| ·采样时间与部位 | 第83页 |
| ·兔抗鸭IFN高免血清的制备及其IgG提取纯化 | 第83-85页 |
| ·兔抗鸭IFN-IgG的检测及分析 | 第85-86页 |
| ·免疫组织化学法方法的建立 | 第86-87页 |
| ·免疫组织化学结果判定 | 第87-88页 |
| 3、结果与分析 | 第88-93页 |
| ·表达质粒纯化及检测 | 第88页 |
| ·原核表达产物SDIFN—a抗原的制备 | 第88-89页 |
| ·SDIFN—a蛋白的纯化 | 第89页 |
| ·琼扩检测及分析 | 第89-90页 |
| ·ELISA检测及分析 | 第90页 |
| ·Western-Blotting检测及分析 | 第90-91页 |
| ·免疫组织化学方法检测及真核表达质粒pcDNA-SDIFN-α体内动态表达规律 | 第91-93页 |
| 4、讨论 | 第93-96页 |
| ·质粒提取及纯化。 | 第93-94页 |
| ·抗原抗体反应的检测 | 第94页 |
| ·免疫组织化学检测表达规律。 | 第94-96页 |
| 5、小结 | 第96-97页 |
| 第七章 鸭α干扰素真核表达质粒pCDNA-SDIFN-α免疫调节剂研究 | 第97-111页 |
| 1 实验材料 | 第97-98页 |
| 2 实验方法 | 第98-100页 |
| ·质粒的制备及纯化 | 第98页 |
| ·基因枪子弹的制备 | 第98页 |
| ·动物分组和免疫 | 第98-99页 |
| ·血样的采集和处理 | 第99页 |
| ·淋巴细胞转化试验 | 第99页 |
| ·CD3+T淋巴细胞数量的检测 | 第99-100页 |
| ·血清IgG的检测 | 第100页 |
| 3 结果与分析 | 第100-106页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α以不同途径、不同剂量与DPV/DVH弱毒作用后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第100-103页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α以不同途径、不同剂量与DVH弱毒作用鸭后激发外周血CD3+T淋巴细胞数量的动态变化 | 第103-105页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α以不同途径、不同剂量与DPV弱毒作用鸭后血清抗体水平的动态变化 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α作用鸭后对弱毒苗激发鸭外周血T淋巴细胞转化能力的影响 | 第106-107页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α作用鸭后对疫苗免疫鸭的外周血CD3+T淋巴细胞数量的影响 | 第107-108页 |
| ·质粒pcDNA-SDIFN-α免疫途径、剂量、时间对疫苗免疫效果的影响 | 第108页 |
| ·a-干扰素抗病毒活性与免疫调节的关系 | 第108-109页 |
| 5、小结 | 第109-111页 |
| 第三部分 结论: | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-121页 |
| 附表 免疫组织化学检测结果 | 第121-125页 |
| 附图 免疫组织化学检测图谱 | 第125-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 发表论文及作者简介 | 第133页 |
