| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1. 启动子克隆方法的研究进展 | 第10-15页 |
| ·启动子及其结构模型 | 第10-11页 |
| ·启动子克隆的几种方法 | 第11-14页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第11-12页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第12-14页 |
| ·启动子克隆的意义 | 第14-15页 |
| 2. 鱼类生长激素基因的研究进展 | 第15-20页 |
| ·鱼类生长激素的结构特征和功能 | 第15-17页 |
| ·鱼类生长激素的分离及活性检测 | 第17页 |
| ·我国鱼类生长激素基因的研究现状 | 第17-18页 |
| ·鱼类生长激素基因克隆 | 第18页 |
| ·鱼类转生长激素基因 | 第18页 |
| ·鱼类生长激素基因研究展望 | 第18-20页 |
| 第二章 β-actin基因启动子与GH基因克隆与活性研究 | 第20-40页 |
| 1. 前言 | 第20页 |
| 2. 实验材料 | 第20页 |
| 3. 实验步骤 | 第20-29页 |
| ·尼罗罗非鱼采血方法 | 第20-21页 |
| ·罗非鱼脑垂体总RNA的提取及检测 | 第21-22页 |
| ·基因组DNA的提取及检测 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·DNA的纯化和回收 | 第25页 |
| ·克隆 | 第25-28页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第29页 |
| 4. 细胞转染 | 第29-32页 |
| ·材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·pEGFP-β-actin启动子表达质粒构建 | 第30页 |
| ·pEGFP-GH融合蛋白表达质粒构建 | 第30页 |
| ·细胞转染 | 第30-31页 |
| ·EGFP与293细胞 | 第31-32页 |
| 5. 实验结果 | 第32-37页 |
| ·尼罗罗非鱼β-actin基因启动子功能验证结果 | 第32-34页 |
| ·尼罗罗非鱼β-actin启动子序列 | 第32-33页 |
| ·pEGFP-β-actin启动子表达质粒构建 | 第33-34页 |
| ·pEGFP-β-actin启动子在293T细胞中的启动表达 | 第34页 |
| ·GH基因与EGFP基因融合表达载体的构建及在真核细胞中表达 | 第34-37页 |
| ·罗非鱼脑垂体组织总RNA的完整性及纯度鉴定 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| ·pEGFP-GH构建与鉴定 | 第36页 |
| ·pEGFP-GH转染293T细胞及表达产物的检测与细胞内定位 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR检测GH基因RNA水平表达 | 第37页 |
| 6. 讨论 | 第37-40页 |
| ·尼罗罗非鱼β-actin基因启动子功能验证结果讨论 | 第37-38页 |
| ·GH基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在真核细胞中表达结果讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 太湖鲢鱼mtDNA D-loop区遗传多样性 | 第40-46页 |
| 1. 前言 | 第40页 |
| 2. 材料和方法 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·mtDNA D-loop区的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR产物纯化与目的片断的克隆及测序 | 第41页 |
| ·数据处理 | 第41页 |
| 3. 结果 | 第41-44页 |
| ·PCR扩增及阳性克隆鉴定 | 第41-42页 |
| ·D-loop区序列多态性及核苷酸变异频率 | 第42-43页 |
| ·单倍型系统发育树构建 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-46页 |
| ·太湖鲢鱼mtDNA D-loop序列多态分析 | 第44-45页 |
| ·太湖鲢鱼系统发育分析 | 第45-46页 |
| 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录:试验试剂及配置 | 第54-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
