| 摘要 | 第1-5页 |
| SUMMARY | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-31页 |
| 1. 引言 | 第11-12页 |
| 2. 黑麦草离体再生体系的研究进展 | 第12-15页 |
| ·黑麦草遗传转化的受体系统 | 第12-15页 |
| ·胚性愈伤组织培养 | 第12-13页 |
| ·悬浮细胞培养 | 第13页 |
| ·原生质体培养 | 第13-14页 |
| ·花药培养 | 第14-15页 |
| ·茎尖培养 | 第15页 |
| 3. 黑麦草遗传转化的主要方法 | 第15-21页 |
| ·直接转化原生质体 | 第15-16页 |
| ·基因枪转化法 | 第16-17页 |
| ·农杆菌转化法 | 第17-20页 |
| ·农杆菌介导外源基因转化植物的机理 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化的优越性及在黑麦草转化中的应用 | 第19-20页 |
| ·硅碳纤维介导法 | 第20-21页 |
| ·外源基因的表达调控 | 第21页 |
| 4. 草坪草遗传转化中转基因细胞或植株的筛选和鉴定 | 第21-23页 |
| ·报告基因 | 第21-22页 |
| ·选择标记基因 | 第22-23页 |
| ·转基因草坪草的分子生物学检测 | 第23页 |
| 5. 转基因技术在草坪草品种改良中的应用 | 第23-27页 |
| ·利用转基因技术对草坪草非生物胁迫抗性的改良 | 第23-25页 |
| ·抗渗透胁迫 | 第23-24页 |
| ·抗离子胁迫 | 第24页 |
| ·抗氧化胁迫 | 第24页 |
| ·与非生物胁迫相关的转录因子 | 第24-25页 |
| ·利用转基因技术对草坪草生物胁迫抗性的改良 | 第25-26页 |
| ·对草坪草抗病性的改良 | 第25页 |
| ·对草坪草抗虫性的改良 | 第25-26页 |
| ·利用转基因技术对草坪草除草剂抗性的改良 | 第26-27页 |
| 6. 黑麦草遗传转化中存在的主要问题和展望 | 第27-28页 |
| 7. 技术路线 | 第28-29页 |
| ·黑麦草胚性愈伤组织的诱导及再生体系的建立 | 第28页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑麦草高效遗传转化体系的建立 | 第28-29页 |
| 8. 本实验的研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 黑麦草愈伤组织的诱导及再生体系的建立 | 第31-44页 |
| 1. 材料与方法 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-32页 |
| ·黑麦草种子去种皮处理 | 第31页 |
| ·黑麦草种子的消毒 | 第31页 |
| ·黑麦草愈伤组织的诱导 | 第31-32页 |
| ·胚性愈伤组织的继代培养 | 第32页 |
| ·黑麦草愈伤组织的再分化 | 第32页 |
| 2. 结果与分析 | 第32-40页 |
| ·不同黑麦草品种种子发芽率的变化 | 第33页 |
| ·不同外植体类型对愈伤组织诱导的影响 | 第33-36页 |
| ·不同外植体类型愈伤组织生长的状态 | 第33-35页 |
| ·不同外植体类型对愈伤组织诱导频率的影响 | 第35-36页 |
| ·不同品种在不同浓度2,4-D 下愈伤组织频率的变化 | 第36-37页 |
| ·黑麦草愈伤组织高效再生体系的建立 | 第37-40页 |
| ·黑麦草愈伤组织再分化的表观现象 | 第37-39页 |
| ·不同浓度6-BA 对黑麦草愈伤组织分化的影响 | 第39-40页 |
| ·不同品种愈伤组织再生植株分化频率的变化 | 第40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| ·外源激素对黑麦草愈伤组织诱导的影响 | 第40-41页 |
| ·外源激素对黑麦草愈伤组织分化的影响 | 第41页 |
| ·受体材料和外植体来源对牧草愈伤组织再生的影响 | 第41-42页 |
| ·其他因素对黑麦草愈伤组织诱导和再生的影响 | 第42页 |
| 4. 小结 | 第42-44页 |
| 第三章 农杆菌介导的黑麦草高效遗传转化体系的建立及转化植株的鉴定 | 第44-62页 |
| 1. 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·试剂和仪器 | 第44-45页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·菌株和载体 | 第45-46页 |
| 2. 方法 | 第46-49页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·pCAMBIA1305.1 质粒向大肠杆菌感受态细胞中的转化 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取（碱裂解小量提取法） | 第47页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·pCAMBIA1305.1 质粒向农杆菌感受态细胞中的转化 | 第48页 |
| ·农杆菌介导的黑麦草遗传转化及转化苗的获得 | 第48-49页 |
| ·农杆菌工程菌浓度及侵染时间对转化的影响 | 第48页 |
| ·愈伤组织的预处理 | 第48页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第48-49页 |
| ·愈伤组织的脱菌培养及GUS 检测 | 第49页 |
| ·抗生素浓度的抑菌效应 | 第49页 |
| ·潮霉素选择压的确立 | 第49页 |
| ·转化苗的获得 | 第49页 |
| 3. 转基因植株的分子鉴定 | 第49-53页 |
| ·黑麦草基因组DNA 的提取 | 第49-51页 |
| ·DNA 纯度及浓度测定 | 第51页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第51-53页 |
| ·绿色荧光蛋白检测 | 第51-52页 |
| ·GUS 组织化学显色反应 | 第52页 |
| ·PCR 检测 | 第52-53页 |
| 4. 结果与分析 | 第53-60页 |
| ·农杆菌工程菌侵染液浓度的确立 | 第53-55页 |
| ·GUS 染色时间的确立 | 第53-54页 |
| ·农杆菌工程菌OD 值的确立 | 第54-55页 |
| ·农杆菌侵染时间对转化率的影响 | 第55-56页 |
| ·共培养时间对抗性愈伤组织及转化植株频率的影响 | 第56-57页 |
| ·抗生素浓度对农杆菌的抑制反应 | 第57页 |
| ·筛选剂潮霉素浓度的确立 | 第57-58页 |
| ·转化植株的GUS 及PCR 鉴定 | 第58-60页 |
| ·转化植株的获得及GUS 鉴定 | 第58-59页 |
| ·PCR 鉴定 | 第59-60页 |
| 5. 讨论 | 第60-61页 |
| ·抗生素的选择 | 第60页 |
| ·选择剂及选择压对转化的影响 | 第60-61页 |
| ·报告基因gus | 第61页 |
| ·乙酞丁香酮对转化效率的影响 | 第61页 |
| 6. 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 附图 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简介 | 第75-76页 |
| 导师简介 | 第76页 |
