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新城疫强弱毒半巢式RT-PCR快速检测及不同基因型NDV疫苗的免疫保护作用研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-11页
符号说明第11-13页
文献综述第13-27页
 1 新城疫病毒概述第13-18页
   ·新城疫病毒的分类第13页
   ·新城疫病毒的结构及致病性分子基础第13-14页
   ·新城疫病毒基因分型第14-16页
     ·利用单克隆抗体技术进行毒株的分型第14-15页
     ·限制性核酸内切酶分析第15页
     ·特定基因片段的序列扩增,绘制系统发育进化树第15-16页
   ·ND 世界流行史和我国ND 现行流行特点及原因第16-18页
     ·NDV 的四次世界大流行及各次流行株第16-17页
     ·我国新城疫流行特点与原因第17-18页
 2 NDV 的防治第18-27页
   ·病毒的分离与鉴定第18-19页
   ·常用检测技术及进展第19-21页
     ·传统血清学检测技术第19页
     ·分子生物学技术及其进展第19-21页
       ·NASBA第20页
       ·LAMP第20页
       ·Phage-Capturing Dot Blot第20页
       ·RAPID-BAP第20-21页
   ·NDV 的免疫机理及免疫历程第21-27页
     ·NDV 的的免疫机理第21-22页
       ·NDV 抗体相关的免疫效应第21-22页
       ·NDV 细胞免疫所起的作用第22页
       ·ND 的局部免疫第22页
     ·NDV 的免疫历史第22-27页
第一章 扩增 F 蛋白基因序列半巢式 RT-PCR 快速灵敏检测及区分NDV第27-43页
 1 材料和方法第27-31页
   ·材料第27-28页
     ·毒株第27-28页
     ·SPF 鸡胚第28页
     ·主要试剂第28页
     ·仪器第28页
   ·方法第28-31页
     ·病毒繁殖第28页
     ·病毒 RNA 抽提第28页
     ·引物设计第28-29页
     ·内参质粒的构建第29页
     ·半巢式 PCR第29-30页
       ·cDNA 合成和第一轮扩增反应第29页
       ·第二轮扩增反应第29-30页
     ·灵敏度和特异性检测第30页
     ·未知毒力情况下检测和测序第30页
     ·基因型分析第30页
     ·毒力确认第30页
     ·人工感染鸡群获得喉头和泄殖腔样品第30-31页
 2 结果第31-39页
   ·体系优化结果第31页
   ·半巢式RT-PCR 特异性的测定第31-32页
   ·半巢式RT-PCR 灵敏度的测定第32-33页
   ·使用半巢式RT-PCR 区别新城疫强弱毒和测序结果第33-35页
   ·进化树分析与毒力验证结果第35-38页
   ·从临床样品中检测新城疫病毒第38-39页
 3 讨论第39-43页
第二章 不同基因型NDV疫苗的免疫保护作用研究第43-50页
 1 材料与方法第43-45页
   ·材料第43页
     ·种毒第43页
     ·0.5%红细胞悬液第43页
     ·试验用鸡和鸡胚第43页
     ·血凝抑制(HI)试验用诊断抗原第43页
     ·主要试剂第43页
   ·方法第43-45页
     ·血凝(HA)试验与 HI 试验第43页
     ·疫苗毒的培养及 EID_(50) 的测定第43-44页
     ·疫苗毒的灭活第44页
     ·制苗用水相的处理第44页
     ·疫苗的乳化与分组第44页
     ·无菌性实验第44页
     ·安全性实验第44页
     ·攻毒株病毒的培养及 EID_(50) 的测定第44-45页
   ·疫苗交叉保护实验第45页
 2 结果第45-49页
   ·疫苗株抗原特性及其 EID_(50) 的测定第45-46页
   ·疫苗质量检验第46-47页
   ·攻毒株EID_(50) 的测定第47页
   ·免疫鸡HI 抗体的动态变化第47-48页
   ·攻毒保护结果第48页
   ·组织病理切片及排毒检测结果第48-49页
 3 讨论第49-50页
Reference第50-51页
附录第51-53页
 附录1 TSS(Transformation and Storage Solution) 法制备感受态细胞第51页
 附录2 转化第51页
 附录3 质粒的小量提取第51-52页
 附录4 红细胞凝集试验(96 孔微量板法第52页
 附录5 红细胞凝集抑制试验第52页
 附录6 鸡CEF 的制备第52-53页
致谢第53页

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