摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
第1章 绪论 | 第8-22页 |
·课题背景 | 第8-13页 |
·深海微生物研究概况 | 第8-9页 |
·Shewanella piezotolerans WP3 研究现状 | 第9-11页 |
·细胞色素c | 第11-13页 |
·课题相关研究进展 | 第13-21页 |
·细菌异化金属还原代谢机制的研究进展 | 第13-17页 |
·WP3 中细胞色素c基因研究概况 | 第17-18页 |
·细胞色素c克隆表达研究进展 | 第18-21页 |
·本论文研究意义和目的及主要内容 | 第21-22页 |
·课题的研究目的意义 | 第21页 |
·论文主要内容 | 第21-22页 |
第2章 实验材料和方法 | 第22-36页 |
·实验材料 | 第22-27页 |
·菌株和质粒 | 第22页 |
·主要试剂及工具酶 | 第22-23页 |
·主要仪器 | 第23-24页 |
·工具软件 | 第24页 |
·引物序列 | 第24-25页 |
·常用培养基、溶液的配制 | 第25-27页 |
·实验方法 | 第27-36页 |
·细菌总RNA的提取与纯化 | 第27-28页 |
·常用PCR技术 | 第28-31页 |
·DNA克隆 | 第31-34页 |
·蛋白表达和纯化 | 第34页 |
·蛋白质浓度的测定 | 第34-35页 |
·免疫印迹杂交(Western Blot) | 第35-36页 |
第3章 不同电子受体条件下WP3 细胞色素c基因的差异转录 | 第36-43页 |
·不同电子受体条件下WP3 菌株总RNA的提取和纯化结果 | 第36-39页 |
·不同电子受体条件下WP3 菌株的生长状况 | 第36-37页 |
·WP3 菌株总RNA的提取结果 | 第37-38页 |
·WP3 总RNA的纯化效果 | 第38-39页 |
·实时荧光定量PCR(RT-PCR)显示差异转录及结果分析 | 第39-42页 |
·RT-PCR引物设计及验证结果 | 第39页 |
·WP3 细胞色素c基因差异转录 | 第39-41页 |
·RT-PCR结果分析 | 第41-42页 |
·本章小结 | 第42-43页 |
第4章 WP3 细胞色素c相关基因序列分析 | 第43-50页 |
·蛋白序列BLAST比对与理化性质预测 | 第43页 |
·疏水性分析与跨膜区段预测 | 第43-46页 |
·信号肽预测 | 第46-49页 |
·功能结构域预测 | 第49页 |
·本章小结 | 第49-50页 |
第5章 WP3 细胞色素c基因的克隆表达与生物学活性表征 | 第50-59页 |
·mtrDEF基因簇的分子克隆 | 第50-52页 |
·质粒的提取和酶切结果 | 第50-51页 |
·目的基因序列PCR扩增和酶切结果 | 第51页 |
·阳性克隆子筛选结果 | 第51-52页 |
·WP3 细胞色素c蛋白的表达和纯化 | 第52-55页 |
·WP3 细胞色素c蛋白表达 | 第52-53页 |
·Western blot分析 | 第53-54页 |
·蛋白纯化 | 第54-55页 |
·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第55页 |
·WP3 细胞色素c的生物学活性表征 | 第55-58页 |
·Swp3274 与pEC86 共表达 | 第55-57页 |
·细胞色素c生物学活性表征 | 第57-58页 |
·本章小结 | 第58-59页 |
结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-65页 |
附录 | 第65-67页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第67-69页 |
致谢 | 第69页 |