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深海细菌Shewanella piezotolerans WP3细胞色素c相关基因的克隆表达和功能鉴定

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第1章 绪论第8-22页
   ·课题背景第8-13页
     ·深海微生物研究概况第8-9页
     ·Shewanella piezotolerans WP3 研究现状第9-11页
     ·细胞色素c第11-13页
   ·课题相关研究进展第13-21页
     ·细菌异化金属还原代谢机制的研究进展第13-17页
     ·WP3 中细胞色素c基因研究概况第17-18页
     ·细胞色素c克隆表达研究进展第18-21页
   ·本论文研究意义和目的及主要内容第21-22页
     ·课题的研究目的意义第21页
     ·论文主要内容第21-22页
第2章 实验材料和方法第22-36页
   ·实验材料第22-27页
     ·菌株和质粒第22页
     ·主要试剂及工具酶第22-23页
     ·主要仪器第23-24页
     ·工具软件第24页
     ·引物序列第24-25页
     ·常用培养基、溶液的配制第25-27页
   ·实验方法第27-36页
     ·细菌总RNA的提取与纯化第27-28页
     ·常用PCR技术第28-31页
     ·DNA克隆第31-34页
     ·蛋白表达和纯化第34页
     ·蛋白质浓度的测定第34-35页
     ·免疫印迹杂交(Western Blot)第35-36页
第3章 不同电子受体条件下WP3 细胞色素c基因的差异转录第36-43页
   ·不同电子受体条件下WP3 菌株总RNA的提取和纯化结果第36-39页
     ·不同电子受体条件下WP3 菌株的生长状况第36-37页
     ·WP3 菌株总RNA的提取结果第37-38页
     ·WP3 总RNA的纯化效果第38-39页
   ·实时荧光定量PCR(RT-PCR)显示差异转录及结果分析第39-42页
     ·RT-PCR引物设计及验证结果第39页
     ·WP3 细胞色素c基因差异转录第39-41页
     ·RT-PCR结果分析第41-42页
   ·本章小结第42-43页
第4章 WP3 细胞色素c相关基因序列分析第43-50页
   ·蛋白序列BLAST比对与理化性质预测第43页
   ·疏水性分析与跨膜区段预测第43-46页
   ·信号肽预测第46-49页
   ·功能结构域预测第49页
   ·本章小结第49-50页
第5章 WP3 细胞色素c基因的克隆表达与生物学活性表征第50-59页
   ·mtrDEF基因簇的分子克隆第50-52页
     ·质粒的提取和酶切结果第50-51页
     ·目的基因序列PCR扩增和酶切结果第51页
     ·阳性克隆子筛选结果第51-52页
   ·WP3 细胞色素c蛋白的表达和纯化第52-55页
     ·WP3 细胞色素c蛋白表达第52-53页
     ·Western blot分析第53-54页
     ·蛋白纯化第54-55页
     ·Bradford法测定蛋白质浓度第55页
   ·WP3 细胞色素c的生物学活性表征第55-58页
     ·Swp3274 与pEC86 共表达第55-57页
     ·细胞色素c生物学活性表征第57-58页
   ·本章小结第58-59页
结论第59-60页
参考文献第60-65页
附录第65-67页
攻读学位期间发表的学术论文第67-69页
致谢第69页

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