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利用TILLING技术筛选油菜根毛突变体及根毛发生发育相关基因的分离

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略词表第11-12页
1. 文献综述第12-25页
   ·植物响应低磷胁迫的适应性机理第12-16页
     ·低磷胁迫时植物根系形态构型变化第12-13页
     ·低磷胁迫时植物生理适应机制第13-16页
       ·低磷胁迫时菌根与排根的形成第13-14页
       ·低磷胁迫时植物根系有机酸和酸性磷酸酶的分泌第14页
       ·低磷胁迫时磷酸转运子的增强表达第14-15页
       ·低磷胁迫时根系对H_2PO_4~-的吸收动力学第15-16页
     ·油菜磷高效机制第16页
   ·植物根毛的发生发育及其相关基因第16-19页
     ·控制植物根毛分化形成的基因第16-18页
       ·根毛的分化形成第16-17页
       ·根毛发生发育基因第17-18页
       ·根毛发生发育与土壤磷的吸收第18页
     ·与植物根毛发生相关的MYB类转录因子第18-19页
       ·转录因子的概念及分类第18页
       ·MYB转录因子的结构特征及其生物学功能第18-19页
       ·MYB类转录因子WER,CPC对根毛发育的遗传调控第19页
   ·TILLING技术在作物遗传改良中的研究进展第19-25页
     ·TILLING技术的原理及技术路线第20-21页
     ·TILLING引物的设计与点突变的检测第21-22页
     ·TILLING技术中突变体表型的鉴定第22页
     ·TILLING技术的特点与其在作物遗传改良中的应用第22-25页
2. 研究意义和目的第25-27页
   ·研究意义第25页
   ·研究基础第25页
   ·研究目的第25页
   ·研究内容第25-26页
   ·技术路线第26-27页
3. 甘蓝型油菜刀BNWER,BN-AT5G49270,BNCPC同源基因的分离第27-40页
   ·材料与方法第27-35页
     ·试验材料与基因信息来源第27页
       ·供试植物材料第27页
       ·载体及菌株第27页
       ·基因信息第27页
     ·试验方法第27-35页
       ·油菜基因组 DNA的提取第27-28页
       ·分离基因的引物设计第28-30页
       ·PCR反应体系及反应程序第30页
       ·PCR-walking实验步骤第30-32页
       ·PCR产物纯化及克隆测序第32-35页
   ·结果与分析第35-38页
     ·BnWER两个全长同源基因的分离第35-37页
     ·Bn-AT5G4927O基因的分离第37-38页
     ·BnCPC基因的分离第38页
   ·讨论第38-40页
4. BNWER突变体的筛选第40-48页
   ·材料与方法第40-44页
     ·试验材料第40页
     ·试验方法第40-44页
       ·芹菜CELI酶的提取第40-41页
       ·BnWER荧光引物的设计第41页
       ·PCR扩增反应体系及反应程序第41-42页
       ·PCR产物用CELI酶切及异丙醇纯化第42-43页
       ·制聚丙烯酰胺凝胶板及LI-COR4300电泳第43-44页
       ·利用PARSESNP生物信息学软件进行蛋白质生物功能分析第44页
   ·结果与分析第44-47页
     ·BnWER荧光引物预检测及合成的结果分析第44-45页
     ·BnWER突变位点的筛选结果第45页
     ·碱基改变对基因功能的影响第45-47页
   ·讨论第47-48页
5. 突变体表型的鉴定及与磷吸收利用的关系第48-52页
   ·材料与方法第48-49页
     ·试验材料第48页
     ·试验方法第48-49页
       ·体式显微镜观察根毛数量第48页
       ·观察突变体和野生型地上部及根系的差异第48-49页
   ·结果与分析第49-50页
     ·野生型和突变体根毛数量的差异第49页
     ·野生型和突变体磷吸收利用效率差异分析第49-50页
   ·讨论第50-52页
6. BNWER-I与BNWER-2的表达分析及基因定位第52-57页
   ·材料与方法第52-55页
     ·试验材料第52页
     ·试验方法第52-55页
       ·油菜根系总RNA的提取,逆转录反应及RT-PCR反应第52-54页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第54-55页
   ·结果与分析第55-56页
     ·BnWER-1的表达分析第55-56页
     ·TN群体及亲本中BnWER基因的多态性第56页
   ·讨论第56-57页
7. 结论与展望第57-60页
   ·结论第57-58页
   ·下一步工作及展望第58-60页
参考文献第60-66页
致谢第66-67页
附录第67-68页

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