| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-33页 |
| ·植酸 | 第18-19页 |
| ·植酸酶 | 第19-29页 |
| ·植酸酶的来源 | 第20-21页 |
| ·植酸酶的分类 | 第21-26页 |
| ·植酸酶的异源表达 | 第26-27页 |
| ·植酸酶的应用 | 第27-29页 |
| ·蛋白质工程 | 第29-30页 |
| ·蛋白质工程概论 | 第29-30页 |
| ·蛋白质工程主要的技术手段 | 第30页 |
| ·植酸酶的蛋白质工程研究 | 第30-31页 |
| ·植酸酶的发展趋势 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 三个耶尔森氏菌来源植酸酶的表达和性质研究 | 第33-69页 |
| 第一节 Yersinia kristeensenii 来源植酸酶基因的表达和性质研究 | 第33-49页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株?载体和Yersinia kristeensenii 植酸酶基因 | 第33页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第33页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基配制 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第34页 |
| ·真核表达载体pPIC9-Ykappa 的构建 | 第34-37页 |
| ·pPIC9-Ykappa 在毕赤酵母中的表达 | 第37-39页 |
| ·毕赤酵母表达重组植酸酶YkAppa 的纯化 | 第39页 |
| ·脱糖基化及SDS-PAGE 分析 | 第39页 |
| ·重组植酸酶YkAppa 的酶学性质分析 | 第39-41页 |
| ·植酸酶YkAppa 体外豆粕水解实验 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-48页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·酵母表达载体pPIC9-Ykappa 的构建 | 第42页 |
| ·重组表达载体在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第42-44页 |
| ·重组植酸酶YkAppa 的酶学性质分析 | 第44-47页 |
| ·YkAppa 植酸酶体外水解豆粕实验 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第二节 Yersinia frederiksenii 来源植酸酶基因的表达和性质研究 | 第49-59页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·菌株、载体和Yersinia frederiksenii 植酸酶基因 | 第49页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第49页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·培养基配制 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第49页 |
| ·原核表达载体pET-226(+)-YfappA 的构建 | 第49-51页 |
| ·pET-226(+)-Yfappa 在BL21(DE3)中的表达及酶活检测 | 第51-52页 |
| ·重组植酸酶YfAppa 的纯化 | 第52页 |
| ·重组植酸酶YfAppa 的酶学性质分析 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-58页 |
| ·序列分析 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-226(+)-Yfappa 的构建 | 第54页 |
| ·植酸酶基因Yfappa 在大肠杆菌中的表达 | 第54页 |
| ·重组植酸酶YfAppa 的纯化 | 第54-55页 |
| ·重组植酸酶YfAppa 的酶学性质分析 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第三节 Yersinia enterocolitica 来源植酸酶基因的表达和性质研究 | 第59-69页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·菌株、载体和Yersinia enterocolitica 植酸酶基因 | 第59页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第59页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·培养基配制 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-62页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第59页 |
| ·真核表达载体pPIC9-Yeappa 的构建 | 第59-61页 |
| ·pPIC9-Yeappa 在毕赤酵母中的表达 | 第61页 |
| ·毕赤酵母表达重组植酸酶YeAppa 的纯化 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第62页 |
| ·重组植酸酶YeAppa 的酶学性质分析 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-67页 |
| ·序列分析 | 第62-63页 |
| ·酵母表达载体pPIC9-Yeappa 的构建 | 第63页 |
| ·重组表达载体在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第63-64页 |
| ·植酸酶YeAppa 的酶学性质分析 | 第64-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 Yersinia frederiksenii 来源植酸酶的分子改良 | 第69-80页 |
| ·实验材料 | 第69页 |
| ·菌株、载体和基因 | 第69页 |
| ·引物合成和核酸序列测定 | 第69页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·培养基配制 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-72页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第69页 |
| ·序列比对与结构模拟 | 第69-70页 |
| ·定点突变 | 第70-72页 |
| ·YfAppa 五个突变体原核表达载体的构建 | 第72页 |
| ·YfAppa 五个突变体在BL21 (DE3)宿主中的表达及酶活检测 | 第72页 |
| ·YfAppa 五个突变体植酸酶的纯化 | 第72页 |
| ·YfAppa 五个突变体的酶学性质分析及其与野生型YfAppa 的比较 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-77页 |
| ·突变点的确定 | 第72-74页 |
| ·YfAppa 五个突变体原核表达载体的构建 | 第74页 |
| ·YfAppa 五个突变体在大肠杆菌中的表达 | 第74页 |
| ·YfAppa 五个突变体植酸酶的纯化 | 第74-75页 |
| ·YfAppa 五个突变体的酶学性质分析及其与野生型YfAppa 的比较 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 影响Yersinia enterocolitica 植酸酶催化效率关键氨基酸的鉴定 | 第80-91页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·菌株、载体和基因 | 第80页 |
| ·引物合成和核酸序列测定 | 第80页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第80页 |
| ·主要仪器 | 第80页 |
| ·试剂 | 第80页 |
| ·培养基配制 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-84页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第80页 |
| ·序列比对与结构模拟 | 第80-81页 |
| ·定点突变 | 第81-83页 |
| ·突变体在毕赤酵母中的表达 | 第83页 |
| ·毕赤酵母表达重组植酸酶突变体的纯化 | 第83页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第83页 |
| ·重组植酸酶突变体的酶学性质分析及其比较 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-87页 |
| ·突变点的确定 | 第84页 |
| ·突变体真核表达载体的构建 | 第84页 |
| ·突变体在毕赤酵母中的表达 | 第84页 |
| ·突变体YeAppa-R79G 的纯化 | 第84页 |
| ·R79G 突变对YeAppa 酶学性质的影响 | 第84-87页 |
| ·大肠杆菌植酸酶EcAppa 突变体的纯化 | 第87页 |
| ·大肠杆菌植酸酶EcAppa 及其突变体的酶学性质比较 | 第87页 |
| ·讨论 | 第87-91页 |
| 第五章 全文结论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109页 |
