| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-24页 |
| ·真核转录因子TFIIH 及其亚基XPB | 第9-15页 |
| ·解旋酶XPB 是多亚基通用转录因子TFIIH 的组分 | 第9-10页 |
| ·XPB 参与转录和修复 | 第10-12页 |
| ·XPB 参与细胞周期调控与凋亡控制 | 第12-14页 |
| ·XPB 参与的其他途径 | 第14页 |
| ·XPB 突变相关疾病 | 第14-15页 |
| ·分枝杆菌的转录起始和核苷酸切除修复(NER) | 第15-17页 |
| ·分枝杆菌的转录起始 | 第15-16页 |
| ·分枝杆菌的核苷酸切除修复 | 第16-17页 |
| ·原核生物中存在XPB 的同源蛋白 | 第17-19页 |
| ·分枝杆菌中存在真核XPB 的同源蛋白Ercc3 | 第18页 |
| ·古细菌中ercc3 基因的研究进展 | 第18-19页 |
| ·串联亲和纯化在研究蛋白相互作用中的应用 | 第19-24页 |
| ·TAP 的原理和方法 | 第19-22页 |
| ·重组工程系统(Recombineering system) | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌株，质粒和DNA 序列 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·溶液及缓冲液 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-41页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·耻垢分枝杆菌基因组的提取 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第28页 |
| ·PCR 扩增M.smegmatis ercc3 终止密码子上，下游片段，TAP 标签及潮霉素抗性基因 | 第28-30页 |
| ·knock-in 载体的构建及knock-in DNA 片段的获得 | 第30页 |
| ·耻构分枝杆菌的电转化 | 第30-32页 |
| ·PCR 验证M.smegmatis mc2 155 ercc3-tap 重组子 | 第32-34页 |
| ·westernblot 验证Ercc3-TAP 表达 | 第34页 |
| ·串联亲和层析纯化Ercc3 蛋白 | 第34-35页 |
| ·蛋白浓缩 | 第35页 |
| ·蛋白银染 | 第35页 |
| ·质谱鉴定 | 第35页 |
| ·PCR 扩增 M.smegmatis rpoC 和 rpoB 基因,link-SBP 标签序列 | 第35-37页 |
| ·M.smegmatis RpoC, Ercc3-SBP, His-T7-SBP 表达载体的构建 | 第37页 |
| ·蛋白质的诱导生成 | 第37页 |
| ·蛋白质的大量表达与纯化 | 第37-39页 |
| ·SDS-PAGE 分析蛋白纯度及分子量 | 第39页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第39页 |
| ·Far western 分析蛋白之间的相互作用 | 第39页 |
| ·SBP pull-down 分析蛋白之间的相互作用 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-50页 |
| ·在基因组上ercc3 基因的C 端敲入TAP-tag 片段 | 第41-42页 |
| ·western blot 验证连有TAP-tag 标签的Ercc3 蛋白的表达情况 | 第42页 |
| ·串联亲和纯化Ercc3 蛋白 | 第42-43页 |
| ·质谱鉴定 | 第43-45页 |
| ·ercc3-sbp，rpoC，rpoB 等基因的克隆和蛋白的表达与纯化 | 第45-47页 |
| ·Far western 与SBP pull-down 分析Ercc3 与RpoC 间的相互作用 | 第47-49页 |
| ·Ercc3 与ATPase 和MSMEG_5705 间的相互作用 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
