| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-31页 |
| 1 前体MRNA剪接与选择性剪接简介 | 第11-13页 |
| 2 剪接反应的化学机制和催化机制(剪接体的组装) | 第13-15页 |
| 3 前体MRNA上的顺式作用元件(CIS-ACTING ELEMENTS/SEQUENCES)和反式作用蛋白因子(SPLICING FACTORS) | 第15-18页 |
| 4 PTB蛋白及其功能简介 | 第18-22页 |
| 5 顺式作用元件的位置效应 | 第22-23页 |
| 6 二级结构对顺式作用元件的影响 | 第23-27页 |
| 7 SMN基因和选择性剪接 | 第27-30页 |
| 8 本课题的研究内容和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-52页 |
| 1 材料 | 第31-42页 |
| ·菌株、细胞系及质粒 | 第31-33页 |
| ·主要生化药品以及来源 | 第33页 |
| ·细胞操作相关试剂 | 第33页 |
| ·酶类 | 第33-34页 |
| ·本研究所用引物 | 第34-39页 |
| ·分析软件 | 第39页 |
| ·溶液的配置 | 第39-42页 |
| 2 方法 | 第42-52页 |
| ·普通克隆的构建 | 第42页 |
| ·搭桥构建插入或删除克隆 | 第42-44页 |
| ·oligo插入构建克隆 | 第44-45页 |
| ·Qucikchange构建克隆 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·转染用超纯质粒的制备 | 第46页 |
| ·细胞实验操作 | 第46-47页 |
| ·细胞转染 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR | 第48-50页 |
| ·western | 第50-51页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第52-82页 |
| PARTⅠ ESE在内含子中可以促进可变外显子的剪接,并且存在显著的位置效应 | 第52-56页 |
| PARTⅡ | 第56-71页 |
| 1 PTB-ISE不能促进SMN2外显子7的选择性剪接,却包含一个强的5’剪接位点 | 第56-61页 |
| 2 PTB-ISE里的强5’剪接位点在SMN1外显子7里也具有竞争能力 | 第61-65页 |
| 3 5 ’剪接位点的位置效应:一个新概念 | 第65-66页 |
| 4 PTB-ISE的剪接增强功能确实不依赖于PTB结合序列 | 第66-69页 |
| 5 全长的PTB-ISE里的强5’剪接位点的选择依赖PTB和NPTB | 第69-71页 |
| PARTⅢ 二级结构对顺式作用元件ESE功能的多向性调节 | 第71-82页 |
| 1 稳定的二级结构以碱基配对的方式屏蔽位于颈区的ESE的功能 | 第71-73页 |
| 2 稳定的二级结构可以影响位于环区的ESE的功能 | 第73-75页 |
| 3 位于稳定的二级结构下游的ESE具有较强活性 | 第75-76页 |
| 4 二级结构和多ESE簇蛋白结合间的竞争作用 | 第76-78页 |
| 5 单碱基突变可能同时导致顺式作用元件的改变和二级结构的改变从而影响剪接 | 第78-79页 |
| 6 二级结构和顺式作用元件互做的模型 | 第79-82页 |
| 第四章 研究工作总结与展望 | 第82-83页 |
| 讨论和展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 研究生期间待发表论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
