| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1. 文献综述 | 第12-20页 |
| ·猪链球菌病 | 第12-15页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·流行特点 | 第13页 |
| ·传染源 | 第13页 |
| ·传染途径 | 第13-14页 |
| ·易感动物 | 第14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| ·免疫球蛋白 | 第15-18页 |
| ·免疫球蛋白(Ig)的分类 | 第15页 |
| ·免疫球蛋白A的结构 | 第15-16页 |
| ·免疫球蛋白A的生物学功能 | 第16-18页 |
| ·中和病原体 | 第17页 |
| ·免疫排斥 | 第17页 |
| ·促进天然抗菌因子作用 | 第17页 |
| ·调节粘膜免疫反应 | 第17-18页 |
| ·免疫球蛋白A蛋白酶(IgA1 protease) | 第18-20页 |
| ·IgA1 protease的组成和结构 | 第18页 |
| ·IgA1 protease的生物学功能 | 第18-19页 |
| ·SS2 05ZYH33 HP1022基因的氨基酸序列分析 | 第19-20页 |
| 2 前言 | 第20-21页 |
| 3 材料和方法 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·抗体 | 第21-23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·细菌培养基 | 第24页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·Western-blot及蛋白质斑点杂交缓冲液的配制 | 第25页 |
| ·镍亲和层析纯化(His.Bind Purification Kit)相关溶液的配制 | 第25页 |
| ·酶联免疫法(ELISA)相关溶液 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-37页 |
| ·猪链球菌2型和E.coli(DH5α)的培养 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·HP1022基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·PCR产物胶回收步骤 | 第27页 |
| ·酶切步骤 | 第27页 |
| ·PCR产物与pET-28a载体的连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒的小量提取 | 第28页 |
| ·重组表达质粒在BL21中的转化与鉴定 | 第28页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第28页 |
| ·确定最佳诱导表达条件 | 第28页 |
| ·蛋白的小量诱导 | 第28-29页 |
| ·蛋白的大量诱导 | 第29页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE | 第29页 |
| ·Western-blot | 第29-30页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·上清蛋白的提取 | 第30页 |
| ·不溶性沉淀蛋白的提取 | 第30页 |
| ·镍亲和层析法(HisBind Purification Kit) | 第30-31页 |
| ·制备兔与鼠抗HP1022的多克隆抗体 | 第31页 |
| ·免疫原的制备 | 第31页 |
| ·免疫程序 | 第31页 |
| ·ELISA检测免疫动物的抗体水平 | 第31页 |
| ·IgA1 protease水解活性的分析 | 第31页 |
| ·HP1022基因在猪链球菌不同菌株和血清型中PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·猪链球菌2型IgA1 protease基因缺失菌株的构建及鉴定 | 第32-34页 |
| ·猪链球菌2型IgA1 protease基因缺失过程简图 | 第32页 |
| ·重组质粒pSET4s-IgA1 protease的PCR快速鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒pSET4s-IgA1 protease的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·SS2感受肽细胞的制备与温敏质粒的电转 | 第32-33页 |
| ·基因缺失菌株的抗性筛选 | 第33页 |
| ·基因缺失菌株的PCR筛选 | 第33页 |
| ·基因缺失菌株的Western Blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·细菌计数方法 | 第34页 |
| ·基因缺失菌株的遗传稳定性试验 | 第34页 |
| ·基因缺失菌株的生长特性试验 | 第34-35页 |
| ·基因缺失菌株的生化特性试验 | 第35页 |
| ·细胞计数法 | 第35页 |
| ·小鼠吞噬细胞的吞噬试验 | 第35-36页 |
| ·细菌粘附Hep-2细胞试验 | 第36页 |
| ·动物致病性试验 | 第36-37页 |
| ·小鼠致病性试验 | 第36页 |
| ·猪致病性试验 | 第36-37页 |
| 4 结果 | 第37-47页 |
| ·重组pHP1022蛋白的构建和鉴定 | 第37-39页 |
| ·基因的克隆,连接和鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组pHP1022的表达与纯化 | 第38页 |
| ·重组pHP1022的免疫学活性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组pHP1022的IgA1 protease活性的鉴定 | 第39页 |
| ·HP1022基因在猪链球菌不同菌株中的分布 | 第39-40页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的鉴定 | 第40-42页 |
| ·重组质粒pSET4s-Pleft-Pright的鉴定 | 第40-41页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的抗性筛选鉴定 | 第41页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的Western Blot鉴定 | 第42页 |
| ·基因缺失菌株的遗传稳定性试验 | 第42-43页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的生长特性试验 | 第43页 |
| ·基因缺失菌株的生化特性试验 | 第43-44页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的吞噬试验 | 第44页 |
| ·基因缺失菌株Δiga的粘附试验 | 第44-45页 |
| ·小鼠致病性试验 | 第45-46页 |
| ·猪致病性试验 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| 6 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59页 |
