| 摘要 | 第11-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-19页 |
| 1.1 研究的目的与意义 | 第14页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 黄瓜的性别表现型 | 第14页 |
| 1.2.2 黄瓜的性别决定基因 | 第14-15页 |
| 1.2.3 低夜温促进雌性分化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 乙烯对黄瓜性别分化的影响 | 第16页 |
| 1.2.5 赤霉素对黄瓜性别分化的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.6 Fibrillion家族的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 研究内容及技术路线 | 第18-19页 |
| 1.3.1 试验主要内容 | 第18页 |
| 1.3.2 试验技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.2 CsPAP-fib的克隆 | 第19-22页 |
| 2.2.1 黄瓜叶片RNA的提取与检测 | 第19页 |
| 2.2.2 cDNA第1链的合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 CsPAP-fib的克隆 | 第20页 |
| 2.2.4 CsPAP-fibPCR扩增产物的回收 | 第20-21页 |
| 2.2.5 CsPAP-fib连接pEASY-T3载体与阳性克隆筛选 | 第21-22页 |
| 2.3 CsPAP-fib的生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.4 CsPAP-fib表达模式分析 | 第22-23页 |
| 2.5 CsPAP-fib亚细胞定位分析 | 第23-25页 |
| 2.5.1 植物绿色荧光表达载体的构建 | 第23页 |
| 2.5.2 质粒的纯化浓缩 | 第23-24页 |
| 2.5.3 拟南芥原生质体细胞的制备 | 第24页 |
| 2.5.4 CsPAP-fib-GFP质粒转化拟南芥原生质体 | 第24-25页 |
| 2.6 CsPAP-fib对黄瓜的遗传转化 | 第25-28页 |
| 2.6.1 试验材料与培养基 | 第25-26页 |
| 2.6.2 遗传转化载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.6.3 黄瓜遗传转化实验方法 | 第27-28页 |
| 2.7 转基因阳性植株功能验证 | 第28-30页 |
| 2.7.1 乙烯含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.7.2 赤霉素含量的测定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-48页 |
| 3.1 CsPAP-fib的克隆 | 第30-31页 |
| 3.1.1 黄瓜植株总RNA的提取 | 第30页 |
| 3.1.2 CsPAP-fib的全长及酶切验证 | 第30-31页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 3.2.1 蛋白质理化性质分析 | 第31页 |
| 3.2.2 蛋白质信号肽预测 | 第31-32页 |
| 3.2.3 CsPAP-fib蛋白跨膜区域预测 | 第32页 |
| 3.2.4 CsPAP-fib蛋白质亲水性与疏水性预测 | 第32-33页 |
| 3.2.5 CsPAP-fib蛋白的高级结构预测 | 第33页 |
| 3.2.6 CsPAP-fib蛋白系统进化分析 | 第33-34页 |
| 3.3 基因表达模式分析 | 第34-36页 |
| 3.3.1 不同夜温处理下CsPAP-fib在不同器官中的表达分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 不同夜温处理下CsPAP-fib在两个发育时期的表达分析 | 第35-36页 |
| 3.4 CsPAP-fib亚细胞定位 | 第36-38页 |
| 3.4.1 植物绿色荧光表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.4.2 CsPAP-fib在拟南芥原生质体的定位 | 第38页 |
| 3.5 CsPAP-fib植物表达载体构建 | 第38-40页 |
| 3.6 黄瓜遗传转化 | 第40-42页 |
| 3.6.1 草甘膦抗性筛选 | 第40-41页 |
| 3.6.2 CsPAP-fib转基因黄瓜植株的获得 | 第41-42页 |
| 3.7 转基因黄瓜抗性植株的分子鉴定 | 第42-43页 |
| 3.7.1 转基因黄瓜的PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.7.2 转基因黄瓜植株的荧光定量PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.8 转基因植株功能验证 | 第43-48页 |
| 3.8.1 转基因植株第一雌花节位表现 | 第43-44页 |
| 3.8.2 转基因植株雌花节率表现 | 第44-45页 |
| 3.8.3 转CsPAP-fib植株的乙烯含量测定分析 | 第45-46页 |
| 3.8.4 转CsPAP-fib植株的赤霉素含量测定分析 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 PAP-fibrillin蛋白家族的研究 | 第48页 |
| 4.2 CsPAP-fib对黄瓜的遗传转化 | 第48-49页 |
| 4.3 CsPAP-fib的表达模式 | 第49页 |
| 4.4 原纤蛋白的亚细胞定位多样性 | 第49-50页 |
| 4.5 CsPAP-fib响应低夜温促进雌花分化 | 第50页 |
| 4.6 展望 | 第50页 |
| 4.7 本研究的创新与不足 | 第50-52页 |
| 4.7.1 本研究的创新之处 | 第50页 |
| 4.7.2 本研究的不足之处 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
