| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 国内外研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 黄瓜棒孢叶斑病 | 第13-15页 |
| 1.1.2 黄瓜霜霉病 | 第15-16页 |
| 1.2 多抗性研究 | 第16-17页 |
| 1.3 CBS结构域蛋白研究进展 | 第17页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.5 研究内容及技术路线 | 第18-19页 |
| 1.5.2 试验主要内容 | 第18页 |
| 1.5.3 试验技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 病原菌胁迫下CsCBS表达模式分析 | 第19-21页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 病原菌悬浮液配置 | 第19页 |
| 2.1.3 人工接种 | 第19页 |
| 2.1.4 取材时间 | 第19页 |
| 2.1.5 RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.1.6 cDNA合成 | 第20页 |
| 2.1.7 引物的设计合成 | 第20-21页 |
| 2.1.8 qRT-PCR分析 | 第21页 |
| 2.1.9 试剂及菌株 | 第21页 |
| 2.2 CsCBS克隆 | 第21-24页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 试验试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 CsCBS基因克隆 | 第22页 |
| 2.2.4 CsCBS基因PCR扩增产物回收 | 第22-23页 |
| 2.2.5 Peasy-T3载体连接及阳性筛选 | 第23-24页 |
| 2.3 CsCBS基因序列分析 | 第24-25页 |
| 2.4 CsCBS亚细胞定位 | 第25-27页 |
| 2.4.1 绿色荧光表达载体构建 | 第25-26页 |
| 2.4.2 试验材料 | 第26页 |
| 2.4.3 拟南芥原生质体的提取 | 第26页 |
| 2.4.4 高浓度质粒提取 | 第26页 |
| 2.4.5 35S-CsCBS-eGFP质粒转化拟南芥原生质体 | 第26-27页 |
| 2.5 黄瓜的遗传转化 | 第27-31页 |
| 2.5.1 试验材料 | 第27页 |
| 2.5.2 CsCBS过表达载体构建 | 第27页 |
| 2.5.3 过表达载体导入根癌农杆菌中 | 第27-28页 |
| 2.5.4 转基因植株鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5.5 转基因植株人工接种鉴定 | 第29页 |
| 2.5.6 转基因植株表达分析 | 第29-30页 |
| 2.5.7 转基因植株生理生化指标测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-43页 |
| 3.1 病原菌胁迫下CsCBS基因表达模式分析 | 第31-32页 |
| 3.2 CsCBS基因克隆 | 第32页 |
| 3.3 CsCBS基因序列分析 | 第32-37页 |
| 3.3.1 CsCBS序列分析 | 第32-34页 |
| 3.3.2 CsCBS结构分析 | 第34-35页 |
| 3.3.3 CsCBS进化分析 | 第35-36页 |
| 3.3.4 CsCBS启动子分析 | 第36-37页 |
| 3.4 CsCBS亚细胞定位 | 第37-38页 |
| 3.4.1 构建CsCBS瞬时表达载体 | 第37-38页 |
| 3.4.2 CsCBS亚细胞定位分析 | 第38页 |
| 3.5 黄瓜遗传转化 | 第38-43页 |
| 3.5.1 过表达载体构建 | 第38-39页 |
| 3.5.2 重组质粒导入根癌农杆菌 | 第39-40页 |
| 3.5.3 获得抗性植株 | 第40页 |
| 3.5.4 转基因植株鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5.5 转基因植株基因表达分析 | 第41页 |
| 3.5.6 转基因植株人工接种鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5.7 转基因植株生理生化指标测定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 病原菌胁迫下CsCBS基因表达模式分析 | 第43页 |
| 4.2 CsCBS基因启动子序列分析 | 第43页 |
| 4.3 CBSDUF家族分析 | 第43页 |
| 4.4 过表达CsCBS基因可提高黄瓜抗病性 | 第43-44页 |
| 4.5 过表达植株生理生化指标 | 第44页 |
| 4.6 本研究的创新与不足 | 第44-45页 |
| 4.6.1 本研究的创新之处 | 第44页 |
| 4.6.2 本研究的不足之处 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |