| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1 灰飞虱的分布、危害及抗药性现状 | 第16-18页 |
| 1.1 灰飞虱的分布与危害 | 第16-17页 |
| 1.2 灰飞虱的抗药性现状 | 第17-18页 |
| 2 灰飞虱的抗性机制 | 第18-27页 |
| 2.1 行为抗性 | 第19页 |
| 2.2 生理学改变 | 第19-20页 |
| 2.3 代谢抗性 | 第20-25页 |
| 2.3.1 多功能氧化酶 | 第20-23页 |
| 2.3.2 酯酶 | 第23-24页 |
| 2.3.3 谷胱甘肽-S-转移酶 | 第24-25页 |
| 2.4 靶标抗性 | 第25-26页 |
| 2.5 抗性相关基因的获得 | 第26-27页 |
| 3 基因的功能验证 | 第27-30页 |
| 3.1 昆虫抗性有关基因的体外表达 | 第27-30页 |
| 3.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第27-28页 |
| 3.1.2 酵母表达系统 | 第28页 |
| 3.1.3 昆虫杆状病毒表达系统 | 第28-29页 |
| 3.1.4 卵母细胞基因表达系统 | 第29-30页 |
| 3.2 RNA干扰 | 第30页 |
| 3.3 转基因昆虫 | 第30页 |
| 4 基因表达的调控 | 第30-35页 |
| 4.1 染色质水平上的调控 | 第30-31页 |
| 4.2 转录水平上的调控 | 第31-32页 |
| 4.3 转录后水平的调控 | 第32-35页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第35-38页 |
| 第二章 灰飞虱溴氰菊酯抗性相关P450基因5'侧翼区的克隆和多态性分析 | 第38-62页 |
| 1. 材料和方法 | 第39-46页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第39页 |
| 1.2 试虫饲养 | 第39-40页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第40页 |
| 1.4 灰飞虱DNA的提取、纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| 1.5 Genomewalker DNA文库的构建 | 第41-42页 |
| 1.6 PCR反应 | 第42-44页 |
| 1.7 常规分子克隆 | 第44-46页 |
| 1.8 序列分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-59页 |
| 2.1 基因组5'侧翼区序列的获得 | 第46页 |
| 2.2 5'侧翼区多态性分析 | 第46-59页 |
| 2.2.1 CYP6AY3v2基因5'侧翼区的多态性分析 | 第46-48页 |
| 2.2.2 CYP6FU1基因5'侧翼区的多态性分析 | 第48-51页 |
| 2.2.3 CYP353D1v2基因5'侧翼区的多态性分析 | 第51-53页 |
| 2.2.4 CYP314A1v2基因5'侧翼区的多态性分析 | 第53-55页 |
| 2.2.5 CYP439A1v3基因5'侧翼区的多态性分析 | 第55-56页 |
| 2.2.6 CYP4C61基因5'侧翼区的多态性分析 | 第56-59页 |
| 3. 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 灰飞虱溴氰菊酯抗性相关P450基因5'侧翼区的转录调控元件分析 | 第62-78页 |
| 1. 材料和方法 | 第63-66页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第63页 |
| 1.2 昆虫饲养 | 第63页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第63页 |
| 1.4 总RNA的提取 | 第63-64页 |
| 1.5 5'-RACE-Ready cDNA和3'-RACE-Ready cDNA的合成 | 第64-65页 |
| 1.6 引物设计 | 第65-66页 |
| 1.7 PCR和常规分子克隆 | 第66页 |
| 1.8 序列分析 | 第66页 |
| 2. 结果 | 第66-74页 |
| 2.1 5'RACE结果 | 第66-69页 |
| 2.2 5'侧翼区的调控元件分析 | 第69-74页 |
| 3. 讨论 | 第74-78页 |
| 第四章 灰飞虱溴氰菊酯抗性相关P450基因5'侧翼区的启动子活性分析 | 第78-90页 |
| 1. 材料方法 | 第79-83页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第79页 |
| 1.2 基因5'侧翼区的扩增 | 第79页 |
| 1.3 质粒载体和目标片段的连接反应 | 第79-80页 |
| 1.4 转化测序 | 第80页 |
| 1.5 无内毒素重组质粒提取 | 第80-81页 |
| 1.6 昆虫细胞S2的培养 | 第81-82页 |
| 1.7 真核细胞转染实验 | 第82页 |
| 1.8 双荧光素酶活性检测 | 第82-83页 |
| 2. 结果 | 第83-87页 |
| 2.1 CYP6FU1基因的5'侧翼区活性分析 | 第83-84页 |
| 2.2 CYP6AY3v2基因的5'侧翼区活性分析 | 第84-86页 |
| 2.3 CYP353D1v2基因的5'侧翼区活性分析 | 第86-87页 |
| 2.4 CYP314A1v2基因的5'侧翼区活性分析 | 第87页 |
| 3. 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 CYP6FU1基因5'侧翼区影响表达的功能突变分析 | 第90-102页 |
| 1. 材料方法 | 第91-95页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第91页 |
| 1.2 侧翼区5'端系列缺失以及突变体的片段扩增 | 第91-94页 |
| 1.3 质粒载体和目标片段的连接反应和转化测序 | 第94页 |
| 1.4 无内毒素重组质粒提取 | 第94页 |
| 1.5 昆虫细胞S2的培养 | 第94页 |
| 1.6 真核细胞转染实验 | 第94页 |
| 1.7 双荧光素酶活性检测 | 第94页 |
| 1.8 单个虫体的总RNA提取和cDNA合成 | 第94-95页 |
| 2. 结果 | 第95-100页 |
| 2.1 调控区的5'端系列缺失分析 | 第95-96页 |
| 2.2 片段-1515～-826的功能分析 | 第96-98页 |
| 2.3 片段-396～-186的功能分析 | 第98-99页 |
| 2.4 5'侧翼区上转录起始位点的功能验证 | 第99-100页 |
| 3. 讨论 | 第100-102页 |
| 第六章 基因转录本的3'UTR克隆和多态性分析 | 第102-122页 |
| 1. 材料方法 | 第103-105页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第103页 |
| 1.2 试虫饲养 | 第103页 |
| 1.3 主要分子试剂和仪器设备 | 第103页 |
| 1.4 总RNA的提取 | 第103页 |
| 1.5 3'RACE-Ready cDNA的合成 | 第103页 |
| 1.6 单个虫体的总RNA提取和cDNA合成 | 第103页 |
| 1.7 引物设计 | 第103-104页 |
| 1.8 PCR反应 | 第104-105页 |
| 2. 结果 | 第105-120页 |
| 2.1 3'RACE结果 | 第105-108页 |
| 2.2 多态性分析 | 第108-120页 |
| 2.2.1 CYP6AY3v2的3'UTR多态性分析 | 第108-110页 |
| 2.2.2 CYP6FU1的3'UTR多态性分析 | 第110-112页 |
| 2.2.3 CYP353D1v2的3'UTR多态性分析 | 第112-114页 |
| 2.2.4 CYP314A1v2的3'UTR多态性分析 | 第114-116页 |
| 2.2.5 CYP439D1v3的3'UTR多态性分析 | 第116-118页 |
| 2.2.6 CYP4C61的3'UTR多态性分析 | 第118-120页 |
| 3 讨论 | 第120-122页 |
| 第七章 3'UTR的活性分析 | 第122-136页 |
| 1 材料方法 | 第123-125页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第123页 |
| 1.2 pAc-Fluc/ pAc-Rluc双荧光素酶报告系统的构建 | 第123-124页 |
| 1.3 基因3'UTR不同基因型以及突变体的片段扩增 | 第124页 |
| 1.4 PCR反应体系 | 第124页 |
| 1.5 质粒载体和目标片段的连接反应 | 第124页 |
| 1.6 转化测序 | 第124-125页 |
| 1.7 无内毒素重组质粒提取 | 第125页 |
| 1.8 昆虫细胞S2的培养 | 第125页 |
| 1.9 真核细胞转染实验 | 第125页 |
| 1.10 双荧光素酶活性检测 | 第125页 |
| 1.11 mRNA稳定性检测 | 第125页 |
| 2 结果 | 第125-133页 |
| 2.1 CYP6FU1的3'UTR的功能验证 | 第125-129页 |
| 2.2 CYP353D1v2的3'UTR功能验证 | 第129-132页 |
| 2.3 CYP314A1v2的3'UTR功能验证 | 第132-133页 |
| 3 讨论 | 第133-136页 |
| 全文总结 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-150页 |
| 附录 | 第150-168页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第168-170页 |
| 致谢 | 第170页 |
