| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| 1.1 转录因子简介 | 第9页 |
| 1.2 MYC转录因子的研究概况 | 第9-11页 |
| 1.2.1 MYC转录因子结构与分类 | 第9-10页 |
| 1.2.2 MYC转录因子的生物学功能 | 第10-11页 |
| 1.2.3 MYC2转录因子对烟碱合成的调控 | 第11页 |
| 1.3 烟碱 | 第11-14页 |
| 1.3.1 烟碱的生物合成过程 | 第11-12页 |
| 1.3.2 烟碱生物合成的调控 | 第12-14页 |
| 2 引言 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-27页 |
| 3.1 材料及培养条件 | 第15-16页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第15页 |
| 3.1.2 烟草生长条件 | 第15页 |
| 3.1.3 实验菌株及主要试剂 | 第15页 |
| 3.1.4 实验载体 | 第15-16页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第16页 |
| 3.2 总RNA的提取 | 第16-17页 |
| 3.3 cDNA第一链的制备 | 第17页 |
| 3.4 植物基因组DNA的提取 | 第17页 |
| 3.5 NtMYC1a/1b基因过表达及RNAi载体的构建 | 第17-21页 |
| 3.5.1 NtMYC1a过表达载体的构建 | 第17-18页 |
| 3.5.2 NtMYC1b-ps1300过表达载体的构建 | 第18-20页 |
| 3.5.2.1 NtMYC1b过表达基因的克隆 | 第18-19页 |
| 3.5.2.2 NtMYC1b -p MD19-T载体的构建 | 第19页 |
| 3.5.2.3 ps1300-NtMYC1b载体的构建 | 第19-20页 |
| 3.5.3 NtMYC1a/1b基因沉默载体的构建 | 第20-21页 |
| 3.5.3.1 PFGC5941-NtMYC1a/1b-I载体构建 | 第20-21页 |
| 3.5.3.2 PFGC5941Nt-MYC1a/1b-II载体构建 | 第21页 |
| 3.5.3.3 PFGC5941-NtMYC1a/1b-III载体构建 | 第21页 |
| 3.6 MYC1a/1b启动子克隆 | 第21-22页 |
| 3.6.1 MYC1b启动子克隆 | 第21-22页 |
| 3.6.2 MYC1a启动子克隆 | 第22页 |
| 3.7 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 3.8 大肠杆菌DH5α 转化 | 第23页 |
| 3.9 农杆菌GV3101感受态细胞的制备。 | 第23页 |
| 3.10 农杆菌GV3101转化 | 第23-24页 |
| 3.11 农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草愈伤组织 | 第24-25页 |
| 3.11.1 烟草无菌苗的获得 | 第24页 |
| 3.11.2 烟草叶盘转化法 | 第24-25页 |
| 3.12 烟草过表达及沉默表达载体的瞬时表达及检测 | 第25-27页 |
| 3.12.1 注射烟草 | 第25-26页 |
| 3.12.2 RT-PCR检测目的基因和PMT表达量 | 第26-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-57页 |
| 4.1 NtMYC1a/1b的生物信息学分析 | 第27-35页 |
| 4.1.1 MYC转录因子家族进化树分析 | 第27-29页 |
| 4.1.2NtMYC1a/1b蛋白疏水性分析 | 第29-30页 |
| 4.1.3 NtMYC1a/1b蛋白跨膜区域分析 | 第30-31页 |
| 4.1.4 NtMYC1a/1b蛋白信号肽分析 | 第31-33页 |
| 4.1.5 NtMYC1a/1b蛋白二级结构预测 | 第33-35页 |
| 4.2 MYC1a/1b基因的克隆及表达载体构建 | 第35-43页 |
| 4.2.1 ps300- NtMYC1a过表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 4.2.2 ps1300-NtMYC1b过表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 4.2.3 PFGC5941-NtMYC1a/1b-I载体构建 | 第39-40页 |
| 4.2.4 PFGC5941Nt-MYC1a/1b-II载体构建 | 第40-41页 |
| 4.2.5 PFGC5941-NtMYC1a/1b-III载体构建 | 第41-43页 |
| 4.3 NtMYC1a/1b启动子克隆 | 第43-46页 |
| 4.4 NtMYC1a/1b启动子序列生物信息学分析 | 第46-50页 |
| 4.5 NtMYC1a/1b真核表达载体瞬时表达分析 | 第50-52页 |
| 4.5.1 过表达载体ps300-NtMYC1a及ps300-NtMYC1b的瞬时表达分析 | 第50-51页 |
| 4.5.2 沉默载体PFGC5941-NtMYC1a/1b的瞬时表达分析 | 第51-52页 |
| 4.6 转基因烟草的鉴定及检测 | 第52-57页 |
| 4.6.1 NtMYC1a/1b转基因苗的鉴定 | 第52-55页 |
| 4.6.2 NtMYC1a/1b转基因烟草的基因表达量分析 | 第55-57页 |
| 5 讨论与结论 | 第57-59页 |
| 5.1 讨论 | 第57-58页 |
| 5.2 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 英文摘要 | 第65页 |
