| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-18页 |
| 1.渗透压调节作用 | 第13-15页 |
| 1.1 肾脏的渗透调节作用 | 第13-15页 |
| 1.2 肾脏多巴胺系统与渗透调节 | 第15页 |
| 2.蛋白质组学 | 第15-16页 |
| 3.本文的研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 渗透胁迫下的金钱鱼肾原代细胞的蛋白质组学研究 | 第18-35页 |
| 1.实验材料 | 第18-19页 |
| 1.1 实验鱼 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.实验方法 | 第19-27页 |
| 2.1 肾原代细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.2 培养基及PBS渗透压调整 | 第20页 |
| 2.3 高、低渗处理肾原代细胞 | 第20页 |
| 2.4 RNA提取及cDNA合成 | 第20-21页 |
| 2.5 细胞总蛋白提取 | 第21页 |
| 2.6 SDS-PAGE电泳 | 第21页 |
| 2.7 蛋白质的FASP酶解 | 第21-22页 |
| 2.8 酶解产物的LC-MS/MS分析 | 第22页 |
| 2.9 Maxquant的非标记分析 | 第22-23页 |
| 2.10 Perseus的统计学和生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.11 GO、KEGG注释及富集分析 | 第23页 |
| 2.12 蛋白质聚类分析 | 第23页 |
| 2.13 定量引物设计及特异性检测 | 第23-26页 |
| 2.14 RT-qPCR验证显著差异蛋白的mRNA表达变化 | 第26页 |
| 2.15 统计分析 | 第26-27页 |
| 3.实验结果 | 第27-33页 |
| 3.1 渗透压刺激前／后细胞形态观察 | 第27页 |
| 3.2 蛋白质浓度及质量分析 | 第27-28页 |
| 3.3 差异表达蛋白质GO功能注释及富集分析 | 第28-31页 |
| 3.4 RT-qPCR验证结果 | 第31-33页 |
| 4.讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 不同盐度驯化下的金钱鱼肾脏蛋白质组分析 | 第35-48页 |
| 1.实验材料 | 第35页 |
| 2.实验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 金钱鱼抽血及血清收集 | 第35页 |
| 2.2 金钱鱼肾组织取样及组织裂解后处理 | 第35-36页 |
| 2.3 iTRAQ标记 | 第36页 |
| 2.4 SCX分级及质谱分析 | 第36页 |
| 2.5 GO、KEGG注释及富集分析 | 第36-37页 |
| 2.6 蛋白质聚类分析及蛋白互作分析 | 第37页 |
| 2.7 LC-MS/MS检测DA、L-dopa以及HVA | 第37页 |
| 2.8 免疫荧光染色 | 第37-38页 |
| 2.9 Westernblot | 第38-39页 |
| 3.结果 | 第39-45页 |
| 3.1 iTRAQ鉴定结果及蛋白质GO功能注释 | 第39-40页 |
| 3.2 多巴胺代谢相关蛋白分析 | 第40-42页 |
| 3.3 多巴胺系统相关蛋白的表达 | 第42页 |
| 3.4 血清以及肾脏中DA、L-dopa及HVA含量测定 | 第42-43页 |
| 3.5 肾脏中NKAα定位 | 第43-44页 |
| 3.6 Westernblot检测NKAα及SaDRD1 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-48页 |
| 总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
