| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号、缩略词和计量单位注释说明 | 第13-15页 |
| 第1章 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 丹参酮ⅡA的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.1.1 丹参酮ⅡA的来源及应用 | 第15页 |
| 1.1.2 丹参酮ⅡA的生理活性 | 第15-17页 |
| 1.1.3 丹参酮ⅡA的含量检测方法 | 第17页 |
| 1.2 植物内生真菌的生物学作用 | 第17-21页 |
| 1.2.1 内生真菌的概念 | 第17-18页 |
| 1.2.2 促进宿主植物的生长发育 | 第18页 |
| 1.2.3 增强宿主植物的抗逆性 | 第18-19页 |
| 1.2.4 抗肿瘤作用 | 第19-20页 |
| 1.2.5 抗氧化作用 | 第20页 |
| 1.2.6 抗菌作用 | 第20-21页 |
| 1.3 基因组重排技术的优势 | 第21-23页 |
| 1.3.1 避免菌株产生“疲劳效应” | 第21页 |
| 1.3.2 更快速,高效,省时,设备简单 | 第21页 |
| 1.3.3 多亲本的基因水平转移 | 第21-22页 |
| 1.3.5 子代菌株具有的遗传多样性 | 第22页 |
| 1.3.6 产生的子代稳定性与安全性高 | 第22-23页 |
| 1.3.7 对由“多基因”调控的性状进行改良 | 第23页 |
| 1.4 基因组重排技术的应用 | 第23-25页 |
| 1.4.1 提高产物产率 | 第23-24页 |
| 1.4.2 增强菌株对环境的耐受性 | 第24页 |
| 1.4.3 提高底物利用率和范围 | 第24页 |
| 1.4.4 改造微生物的代谢途径产生新的代谢产物 | 第24-25页 |
| 1.5 研究的内容及意义 | 第25-27页 |
| 第2章 原生质体的制备与再生 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第27页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第27页 |
| 2.1.3 实验菌株 | 第27-28页 |
| 2.1.4 培养基 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 孢子悬液的制备 | 第28页 |
| 2.2.2 原生质体的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 原生质体的再生 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 菌龄对原生质体制备的影响 | 第30页 |
| 2.3.2 酶液的组成对原生质体制备率的影响 | 第30-32页 |
| 2.3.3 酶解时间对原生质体制备率的影响 | 第32页 |
| 2.3.4 酶解温度对原生质体的制备的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.5 不同渗透压稳定剂对原生质体的影响 | 第33页 |
| 2.3.6 MgSO_4渗透压稳定剂浓度对原生质体形成的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.7 酶解时间与再生率的关系 | 第34-35页 |
| 2.3.8 酶解pH对原生质体再生的影响 | 第35页 |
| 2.3.9 不同渗透压稳定剂对原生质体再生的影响 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-39页 |
| 第3章 基因组重排选育丹参酮ⅡA的高产菌株 | 第39-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第39页 |
| 3.1.3 实验菌株 | 第39-40页 |
| 3.1.4 培养基 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 原生质体灭活 | 第40页 |
| 3.2.2 原生质体融合 | 第40-41页 |
| 3.2.3 基因组重排选育 | 第41页 |
| 3.2.4 融合菌稳定性的测试 | 第41页 |
| 3.2.5 菌丝体中丹参酮ⅡA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.6 紫外分光光度计检测参酮ⅡA含量 | 第42页 |
| 3.2.7 高产菌株的HPLC分析 | 第42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.3.1 原生质体紫外灭活条件探究 | 第42-43页 |
| 3.3.2 原生质体热灭活条件探究 | 第43-44页 |
| 3.3.3 融合剂PEG浓度对原生质体融合的影响 | 第44页 |
| 3.3.4 融合时间对原生质体融合的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.5 Ca~(2+)浓度对原生质体的融合的影响 | 第45页 |
| 3.3.6 响应面分析法对融合条件的优化 | 第45-48页 |
| 3.3.7 基因组重排构建遗传多样性菌群 | 第48-50页 |
| 3.3.8 高产菌株的HPLC分析 | 第50-51页 |
| 3.3.9 高产菌株的遗传稳定性检测 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第4章 高产菌株的鉴定及RAPD分析 | 第53-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第53页 |
| 4.1.2 试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 培养基 | 第53页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 4.2.1 内生真菌形态学鉴定 | 第54页 |
| 4.2.2 内生真菌分子生物学鉴定 | 第54-56页 |
| 4.2.3 菌株的RAPD分析 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-60页 |
| 4.3.1 菌株F3-4的形态学鉴定 | 第57页 |
| 4.3.2 菌株F3-4的分子生物学鉴定 | 第57-59页 |
| 4.3.3 RAPD的多态性分析 | 第59页 |
| 4.3.4 各个菌株菌株间亲缘关系聚类图 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-63页 |
| 第5章 高产菌株F3-4的培养基组成优化 | 第63-75页 |
| 5.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 5.1.1 实验试剂 | 第63页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第63页 |
| 5.1.3 实验菌株 | 第63页 |
| 5.1.4 培养基 | 第63-64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 5.2.1 种子液的制备 | 第64页 |
| 5.2.2 基础培养基的选择 | 第64页 |
| 5.2.3 培养基组成的单因素选择 | 第64-65页 |
| 5.2.4 培养基组成的优化 | 第65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-73页 |
| 5.3.1 基础培养基的选择 | 第65-69页 |
| 5.3.2 培养基组成的单因素选择 | 第69-70页 |
| 5.3.3 响应面对培养基的优化 | 第70-73页 |
| 5.4 讨论 | 第73-75页 |
| 第6章 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读硕士学位期间的科研成果 | 第89页 |