| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 外泌小体生源、组成及功能 | 第10-19页 |
| 1.1.1 外泌小体的生源 | 第11-14页 |
| 1.1.2 外泌小体的分子组成 | 第14-15页 |
| 1.1.3 外泌小体的功能与应用 | 第15-19页 |
| 1.2 外泌小体中的微小核糖核酸 | 第19-23页 |
| 1.2.1 微小核糖核酸简介 | 第20页 |
| 1.2.2 外泌小体中miRNA的功能 | 第20-21页 |
| 1.2.3 外泌小体中miRNA的分选机制 | 第21-23页 |
| 1.3 本文的研究目的与内容 | 第23-24页 |
| 第二章 肿瘤分泌外泌小体的机制研究 | 第24-51页 |
| 2.1 引言 | 第24-28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 细胞与试剂 | 第28页 |
| 2.2.2 原代肌细胞提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 细胞外泌小体的分离 | 第29页 |
| 2.2.4 透射电镜 | 第29页 |
| 2.2.5 外泌小体粒径与数量检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 免疫印记和Phos-tag SDS-PAGE | 第30-31页 |
| 2.2.7 细胞葡萄糖摄取与乳酸产生水平检测 | 第31页 |
| 2.2.8 细胞转染 | 第31页 |
| 2.2.9 细胞免疫荧光 | 第31页 |
| 2.2.10 免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.2.11 化学交联 | 第32页 |
| 2.2.12 质谱检测 | 第32-33页 |
| 2.2.13 体外磷酸化实验 | 第33页 |
| 2.2.14 统计学分析 | 第33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-49页 |
| 2.3.1 外泌小体的分离与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 细胞内的糖酵解水平与其分泌外泌小体的数量存在相关性 | 第34-36页 |
| 2.3.3 糖酵解限速酶PKM2在外泌小体分泌中起关键作用 | 第36-41页 |
| 2.3.4 PKM2对外泌小体分泌的影响依赖于SNAP-23 | 第41-43页 |
| 2.3.5 磷酸化的PKM2在exosome分泌过程中与SNAP-23相互作用 | 第43-45页 |
| 2.3.6 SNAP-23 95号丝氨酸的磷酸化促进外泌小体分泌 | 第45-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 外泌小体选择性包裹微小核糖核酸的机制研究 | 第51-79页 |
| 3.1 引言 | 第51-53页 |
| 3.2 材料与方法 | 第53-57页 |
| 3.2.1 细胞与试剂 | 第53页 |
| 3.2.2 细胞核提取 | 第53-54页 |
| 3.2.3 细胞中RNA的抽提 | 第54页 |
| 3.2.4 细胞转染 | 第54页 |
| 3.2.5 miRNA的qPCR定量检测 | 第54-55页 |
| 3.2.6 细胞免疫荧光 | 第55页 |
| 3.2.7 Northern blot | 第55-56页 |
| 3.2.8 motif计算 | 第56-57页 |
| 3.2.9 iTRAQ实验 | 第57页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-78页 |
| 3.3.1 核转运蛋白家族成员Importin-8运输miRNA进入细胞核中 | 第57-67页 |
| 3.3.2 四种核转运蛋白家族成员负责运输miRNA进入外泌小体中 | 第67-73页 |
| 3.3.3 miRNA前体上的motif决定其被选择性包裹进外泌小体中 | 第73-76页 |
| 3.3.4 miRNA前体茎环结构区域的motif影响miRNA分选至外泌小体 | 第76-77页 |
| 3.3.5 SRp20识别CAUC motif介导miRNA进入外泌小体 | 第77-78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-79页 |
| 第四章 论文总结与研究意义 | 第79-81页 |
| 4.1 论文总结 | 第79页 |
| 4.2 研究意义 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 攻读博士学位期间发表成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
