| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 地中海拟无枝酸菌介绍 | 第8-10页 |
| 1.2 利福霉素(rifamycin) | 第10-15页 |
| 1.2.1 利福霉素简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 利福霉素的生物合成 | 第11-13页 |
| 1.2.3 利福霉素的抑菌机制 | 第13-14页 |
| 1.2.4 利福霉素生物合成的反馈抑制 | 第14-15页 |
| 1.3 三亲杂交 | 第15-18页 |
| 1.3.1 重组基因导入受体细胞的途径 | 第15-16页 |
| 1.3.2 接合转移 | 第16-17页 |
| 1.3.3 三亲杂交的原理 | 第17页 |
| 1.3.4 三亲杂交的影响因素 | 第17-18页 |
| 1.4 研究背景和研究内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 地中海拟无枝酸菌三亲杂交条件优化 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌质粒的提取和转化 | 第21-24页 |
| 2.2.2 穿梭载体pULVK1-Am-OriT的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.3 三亲杂交步骤 | 第26-27页 |
| 2.2.4 三亲杂交条件优化 | 第27页 |
| 2.2.5 地中海拟无枝酸菌质粒提取方法 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 OriT基因克隆 | 第28页 |
| 2.3.2 穿梭载体pULVK1-Am-OriT的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.3 三亲杂交条件优化 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-34页 |
| 第三章 构建地中海拟无枝酸菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因敲除菌株 | 第34-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.3 培养基 | 第35页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第35页 |
| 3.1.5 引物 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.2.1 部分6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3.2.2 基因失活载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.3 电击转化及含抗性标记基因突变株的筛选 | 第39-40页 |
| 3.2.4 无抗性标记突变株的筛选 | 第40页 |
| 3.2.5 突变菌株和原始菌株发酵产物比较 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-43页 |
| 3.3.1 地中海拟无枝酸菌基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 3.3.2 部分6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的克隆 | 第41页 |
| 3.3.3 6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因失活载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.4 基因失活突变体的筛选 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 结论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录A | 第52-54页 |
| 附录B | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
