| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 前言 | 第9页 |
| 1.2 关于该课题的研究现状以及发展趋势 | 第9-13页 |
| 1.2.1 酿酒酵母合成异丁醇研究现状 | 第9-12页 |
| 1.2.2 其它微生物合成异丁醇的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 本论文研究思路和创新点 | 第13-16页 |
| 1.3.1 研究思路和方法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 创新点 | 第14-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-21页 |
| 2.1.1 菌种、质粒和引物 | 第16-18页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21页 |
| 2.2 实验流程 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.3.1 制备大肠杆菌的感受态细胞 | 第22页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第22-23页 |
| 2.3.3 质粒的提取 | 第23页 |
| 2.3.4 酵母染色体的快速分离 | 第23-24页 |
| 2.3.5 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.6 凝胶电泳法检测DNA | 第25页 |
| 2.3.7 DNA的限制酶消化 | 第25-26页 |
| 2.3.8 DNA连接反应 | 第26页 |
| 2.3.9 酚抽提纯化PCR产物 | 第26页 |
| 2.3.10 酵母细胞的转化—醋酸锂转化法 | 第26-27页 |
| 2.3.11 用一步基因置换法缺失目的基因 | 第27-28页 |
| 2.3.12 RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.4 发酵条件 | 第29页 |
| 2.5 发酵样品的测定方法 | 第29-31页 |
| 2.5.1 酵母菌株生长曲线的测定 | 第29页 |
| 2.5.2 DNS法测定发酵液中葡萄糖 | 第29-30页 |
| 2.5.3 发酵液异丁醇、乙醇、乙酸和甘油的测定 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第31-61页 |
| 3.1 质粒pUC18-LPD1P-RYUR-LPD1T的构建 | 第31-35页 |
| 3.2 基因GPD2的缺失 | 第35-40页 |
| 3.2.1 质粒pUC18-GPD2P-RYUR-GPD2T的构建 | 第35-39页 |
| 3.2.2 利用一步基因置换法缺失GPD2 | 第39-40页 |
| 3.3 基因PDC6的缺失 | 第40-41页 |
| 3.4 基因GPD1的缺失 | 第41-46页 |
| 3.4.1 质粒pUC18-GPD1P-RYUR-GPD1T的构建 | 第41-44页 |
| 3.4.2 利用一步基因置换法缺失GPD1 | 第44-46页 |
| 3.5 缺失GPD2以及PDC6菌株发酵性能检测 | 第46-51页 |
| 3.5.1 工程菌HZAL–13pILV2和HZAL–14pILV2的生长特性 | 第46-47页 |
| 3.5.2 工程菌HZAL–13pILV2和HZAL–14pILV2的异丁醇产量 | 第47-48页 |
| 3.5.3 工程菌HZAL–13pILV2和HZAL–14pILV2的乙醇产量 | 第48-49页 |
| 3.5.4 工程菌HZAL–13pILV2和HZAL–14pILV2的甘油合成 | 第49页 |
| 3.5.5 工程菌HZAL–13pILV2和HZAL–14pILV2的乙酸合成 | 第49-50页 |
| 3.5.6 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 过表达ILV2、ARO10基因菌株的RT-PCR检测 | 第51-55页 |
| 3.6.1 RNA的提取 | 第51-53页 |
| 3.6.2 检测数据的处理 | 第53-54页 |
| 3.6.3 ARO10基因RT-PCR检测 | 第54页 |
| 3.6.4 ILV2基因RT-PCR检测 | 第54-55页 |
| 3.7 过表达ILV2、ARO10菌株发酵性能检测 | 第55-60页 |
| 3.7.1 工程菌W303–1ApILV2pARO10的生长特性 | 第55-57页 |
| 3.7.2 工程菌W303–1ApILV2pARO10的异丁醇产量 | 第57页 |
| 3.7.3 工程菌W303–1ApILV2pARO10的乙醇产量 | 第57-58页 |
| 3.7.4 工程菌W303–1ApILV2pARO10的甘油合成 | 第58页 |
| 3.7.5 工程菌W303–1ApILV2pARO10的乙酸合成 | 第58-59页 |
| 3.7.6 讨论 | 第59-60页 |
| 3.8 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
