| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-39页 |
| 1.1 植物细胞信号转导机理 | 第12页 |
| 1.2 植物钙信号的研究进展 | 第12-24页 |
| 1.2.1 钙信号的提出 | 第13-15页 |
| 1.2.2 Ca~(2+)信号的解码机制 | 第15-21页 |
| 1.2.3 CBL/CIPK调控网络的功能和机理 | 第21-23页 |
| 1.2.4 蛋白磷酸酶PP2C负调控CBL/CIPK信号通路 | 第23页 |
| 1.2.5 CBL/CIPK调控网络的保守性 | 第23-24页 |
| 1.3 Ca~(2+)信号与活性氧信号的互作 | 第24-25页 |
| 1.4 活性氧ROS信号的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.1 植物RBOHs介导并调控信号分子ROS的生成 | 第25-26页 |
| 1.4.2 ROS的清除和平衡机制 | 第26-27页 |
| 1.5 NADPH氧化酶RBOHs的生理功能 | 第27-31页 |
| 1.5.1 RBOHs在植物细胞生长和发育中的功能 | 第27页 |
| 1.5.2 RBOHs在响应植物非生物胁迫中的功能 | 第27-30页 |
| 1.5.3 RBOHs在植物免疫中的功能 | 第30-31页 |
| 1.6 RBOHs分子调控机制的研究进展 | 第31-35页 |
| 1.6.1 RBOHs的活性受到Ca~(2+)调控 | 第31-32页 |
| 1.6.2 RBOHs的活性受到多种激酶的磷酸化调控 | 第32-34页 |
| 1.6.3 RBOHs的活性受到14-3-3蛋白的调控 | 第34页 |
| 1.6.4 RBOHs的活性受到ROP和巯基亚硝酸化的调控 | 第34-35页 |
| 1.7 Ca~(2+)和ROS的长距离信号转导 | 第35-37页 |
| 1.7.1 ROS信号的长距离转导 | 第35页 |
| 1.7.2 Ca~(2+)信号的长距离转导 | 第35-37页 |
| 1.7.3 ROS和Ca~(2+)长距离信号转导的交叉互作 | 第37页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第39-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第39页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 2.1.2 菌株 | 第39页 |
| 2.2 载体和引物 | 第39-41页 |
| 2.2.1 载体 | 第39-40页 |
| 2.2.2 载体构建信息 | 第40-41页 |
| 2.2.3 相关引物 | 第41页 |
| 2.3 酶和试剂 | 第41-42页 |
| 2.4 主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.5 常用培养基及试剂的配制 | 第43页 |
| 2.6 实验方法 | 第43-60页 |
| 2.6.1 拟南芥的培养 | 第43页 |
| 2.6.2 土壤中生长的拟南芥的盐胁迫处理实验 | 第43-44页 |
| 2.6.3 液体培养的拟南芥的盐胁迫处理和Na含量检测实验 | 第44-45页 |
| 2.6.4 载体的构建 | 第45-49页 |
| 2.6.5 拟南芥转基因材料的获得 | 第49页 |
| 2.6.6 拟南芥的PI染色以及中柱内PI吸收的定量分析 | 第49-50页 |
| 2.6.7 重组蛋白的表达及纯化 | 第50-52页 |
| 2.6.8 本生烟叶片中的总蛋白提取 | 第52页 |
| 2.6.9 蛋白免疫印迹 | 第52-54页 |
| 2.6.10 体外磷酸化实验 | 第54-56页 |
| 2.6.11 拟南芥总RNA的提取和反转录 | 第56-57页 |
| 2.6.12 实时定量PCR | 第57页 |
| 2.6.13 本生烟叶片中的ROS生成检测 | 第57-58页 |
| 2.6.14 HEK293T细胞的转染和ROS的检测 | 第58-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-94页 |
| 3.1 RBOHF的活性受到CBL/CIPK复合物的调控 | 第60-64页 |
| 3.1.1 CIPKI1和CIPK26在HEK293T细胞中强烈激活RBOHF | 第60-61页 |
| 3.1.2 CIPK11在体外磷酸化RBOHF-N | 第61-62页 |
| 3.1.3 CIPK11和CIPK26对RBOHF的激活没有协同效应 | 第62-63页 |
| 3.1.4 CBL1/CIPK26对RBOHF活性的增强依赖于激酶的活性以及复合物的细胞膜定位 | 第63-64页 |
| 3.2 RBOHF的活性受到Ca~(2+)的调控 | 第64-67页 |
| 3.2.1 RBOHF蛋白活性的增强依赖于Ca~(2+)的结合 | 第64-65页 |
| 3.2.2 Ca~(2+)能够在体外增强CIPK26对RBOHF-N的磷酸化 | 第65-67页 |
| 3.3 CBL1/CIPK26复合物在本生烟叶片中增强RBOHF的活性 | 第67-68页 |
| 3.4 RBOHF相关基因的突变体表型分析 | 第68-75页 |
| 3.4.1 RBOHF和CBL4作用于不同的盐胁迫响应通路中 | 第68-72页 |
| 3.4.2 RBOHF调控通路中的相关基因的表型分析 | 第72-74页 |
| 3.4.3 Ca~(2+)能够影响拟南芥根部的发育 | 第74-75页 |
| 3.5 OST1通过磷酸化强烈激活RBOHF | 第75-81页 |
| 3.5.1 PM-OST1在HEK293T细胞中激活RBOHF | 第75-76页 |
| 3.5.2 Ca~(2+)的结合有助于增强PM-OST1对RBOHF的激活 | 第76-78页 |
| 3.5.3 OST1突变体的表型分析 | 第78-79页 |
| 3.5.4 CBL1/CIPK26和PM-OST1协同增强RBOHF的活性 | 第79页 |
| 3.5.5 CIPK26作用于RBOHF的三个丝氨酸位点 | 第79-81页 |
| 3.6 RBOHF的磷酸化位点在植物体内的功能分析 | 第81-86页 |
| 3.7 RBOHF的磷酸化位点在HEK293T细胞中的功能分析 | 第86-91页 |
| 3.7.1 RBOHF磷酸化位点的突变抑制了CBL1/CIPK26对RBOHF的激活 | 第86-89页 |
| 3.7.2 RBOHF磷酸化位点的突变减弱了PM-OST1对RBOHF的激活 | 第89-90页 |
| 3.7.3 RBOHF磷酸化位点的突变抑制了CBL1/CIPK26和PM-OST1对RBOHF的协同激活 | 第90-91页 |
| 3.8 ABI1负调控RBOHF的活性 | 第91-94页 |
| 3.8.1 ABI1抑制PM-OST1对RBOHF的激活 | 第91-92页 |
| 3.8.2 ABI1抑制CBL1/CIPK26对RBOHF的激活 | 第92-93页 |
| 3.8.3 ABI1抑制CBL1/CIPK26和PM-OST1对RBOHF的协同激活 | 第93-94页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第94-101页 |
| 4.1 多个CIPK蛋白激酶调控RBOHF活性的机制探讨 | 第94-95页 |
| 4.2 RBOHF的Ca~(2+)结合和磷酸化调控机制的探讨 | 第95-97页 |
| 4.3 CBL1/CIPK26和OST1协同调控RBOHF活性的机制探讨 | 第97-99页 |
| 4.4 ABI1负调控CBL1/CIPK26和OST1对RBOHF激活的机制探讨 | 第99页 |
| 4.5 拟南芥通过复杂的机制精细调控RBOHF的活性 | 第99-101页 |
| 第五章 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-119页 |
| 附录 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 作者简介 | 第122页 |
