| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 逆境胁迫对植物生长的影响 | 第11-13页 |
| 1.2.1 高温胁迫对植物生长的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.2 ABA对植物生长的影响 | 第12页 |
| 1.2.3 盐胁迫对植物形态及生长发育的影响 | 第12-13页 |
| 1.2.4 干旱胁迫对植物生长的影响 | 第13页 |
| 1.3 启动子简介 | 第13页 |
| 1.4 转录因子 | 第13-15页 |
| 1.4.1 bHLH转录因子简介 | 第13-14页 |
| 1.4.2 小黑杨PxbHLH01/02简介 | 第14页 |
| 1.4.3 拟南芥UPBEAT1(UPB1)简介 | 第14-15页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第15-16页 |
| 2 小黑杨PxbHLH01/02启动子的载体构建及表达活性分析 | 第16-23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第16-19页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 菌种与载体 | 第16页 |
| 2.1.3 主要的试剂及药品 | 第16页 |
| 2.1.4 PxbHLH01和PxbHLH02启动子的GUS报告载体构建 | 第16-17页 |
| 2.1.5 三亲杂交及农杆菌的遗传转化 | 第17-18页 |
| 2.1.6 PxbHLH01和PxbHLH02启动子在烟草中的表达活性分析 | 第18-19页 |
| 2.2 结果分析 | 第19-21页 |
| 2.2.1 植物瞬时表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第19-20页 |
| 2.2.2 启动子活性的检测 | 第20-21页 |
| 2.3 讨论 | 第21-22页 |
| 2.4 本章小结 | 第22-23页 |
| 3 PxbHLH01/02在拟南芥中的功能分析 | 第23-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 3.1.2 菌株、载体和主要试剂 | 第23页 |
| 3.2 转基因拟南芥的获得 | 第23-27页 |
| 3.2.1 质粒的提取 | 第23-24页 |
| 3.2.2 目的基因cDNA的获得 | 第24页 |
| 3.2.3 目的片段的纯化回收 | 第24-25页 |
| 3.2.4 载体线性化及目的片段与载体的连接 | 第25页 |
| 3.2.5 转化及阳性克隆的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2.6 重组质粒的提取 | 第26页 |
| 3.2.7 农杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 3.2.8 转化农杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| 3.2.9 阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| 3.2.10 拟南芥的培养 | 第26-27页 |
| 3.2.11 拟南芥转化 | 第27页 |
| 3.3 拟南芥阳性植株的鉴定 | 第27-29页 |
| 3.3.1 拟南芥转基因植株的Basta初步筛选 | 第27页 |
| 3.3.2 转基因拟南芥总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.3.3 cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥植株的半定量RT-PCR鉴定 | 第29页 |
| 3.4 转基因拟南芥表型的测定分析 | 第29-31页 |
| 3.4.1 逆境胁迫条件下转基因拟南芥生长变化 | 第29页 |
| 3.4.2 转PxbHLH01/02基因的UPB1突变体(upb1-1)的表型恢复 | 第29-30页 |
| 3.4.3 非生物胁迫条件下逆境胁迫相关基因的定量表达分析 | 第30-31页 |
| 3.5 结果分析 | 第31-39页 |
| 3.5.1 PxbHLH01和PxbHLH02的转录表达 | 第31-32页 |
| 3.5.2 逆境胁迫条件下PxbHLH01/02对拟南芥萌发的影响 | 第32-34页 |
| 3.5.3 逆境胁迫条件下PxbHLH01/02对拟南芥子叶绿化的影响 | 第34-36页 |
| 3.5.4 逆境胁迫条件下PxbHLH01/02对拟南芥生根的影响 | 第36页 |
| 3.5.5 PxbHLH01/02基因可恢复upb1-1的表型 | 第36-37页 |
| 3.5.6 PxbHLH01/02对逆境胁迫相关基因表达的影响 | 第37-39页 |
| 3.6 讨论 | 第39-40页 |
| 3.7 本章小结 | 第40-41页 |
| 4 PxbHLH02在小黑杨中的功能分析 | 第41-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 4.1.2 植物材料处理 | 第41页 |
| 4.1.3 主要试剂和药品 | 第41页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 4.2.1 超氧化物歧化酶(SOD)的测定 | 第42页 |
| 4.2.2 过氧化物酶(POD)活性的测定 | 第42-43页 |
| 4.2.3 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第43页 |
| 4.2.4 过氧化氢(H_2O_2)含量的测定 | 第43页 |
| 4.2.5 相对电导率的测定 | 第43-44页 |
| 4.2.6 活性氧染色 | 第44页 |
| 4.2.7 小黑杨总RNA提取 | 第44页 |
| 4.2.8 小黑杨cDNA的合成 | 第44-46页 |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 4.3 结果分析 | 第47-52页 |
| 4.3.1 PxbHLH02对小黑杨生长的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.2 胁迫条件下SOD和POD活性的分析 | 第48-49页 |
| 4.3.3 胁迫条件下H_2O_2含量的分析 | 第49-50页 |
| 4.3.4 胁迫条件下MDA含量和相对电导率的分析 | 第50页 |
| 4.3.5 PxbHLH02对逆境胁迫后植物氧化损伤的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.6 PxbHLH02对逆境胁迫相关基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
