| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第16-26页 |
| 1.1 合成生物学 | 第16-17页 |
| 1.2 莽草酸途径 | 第17-20页 |
| 1.2.1 莽草酸途径概述 | 第17页 |
| 1.2.2 莽草酸途径中的酶 | 第17-20页 |
| 1.3 水杨酸 | 第20-22页 |
| 1.3.1 水杨酸的性质 | 第20-21页 |
| 1.3.2 水杨酸的应用 | 第21页 |
| 1.3.3 水杨酸的生产方式 | 第21-22页 |
| 1.4 粘糠酸 | 第22-24页 |
| 1.4.1 粘糠酸的性质 | 第22页 |
| 1.4.2 粘糠酸的应用 | 第22页 |
| 1.4.3 粘糠酸的生产方法 | 第22-24页 |
| 1.5 RED基因重组 | 第24页 |
| 1.6 立题的目的及意义 | 第24页 |
| 1.7 本论文的研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 常规实验方法 | 第26-38页 |
| 2.1 仪器 | 第26页 |
| 2.2 试剂 | 第26页 |
| 2.3 培养基 | 第26页 |
| 2.4 基因组提取 | 第26-27页 |
| 2.5 质粒提取 | 第27-28页 |
| 2.6 PCR | 第28-30页 |
| 2.6.1 克隆PCR | 第28-29页 |
| 2.6.2 验证PCR | 第29页 |
| 2.6.3 Overlap PCR | 第29-30页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.8 DNA产物的胶回收 | 第31-32页 |
| 2.9 酶切 | 第32页 |
| 2.10 连接 | 第32-33页 |
| 2.11 转化 | 第33-34页 |
| 2.11.1 化学转化 | 第33页 |
| 2.11.2 电转化 | 第33-34页 |
| 2.12 目的蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.13 细胞破碎 | 第34页 |
| 2.14 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2.15 OD600测定细胞浓度 | 第35页 |
| 2.16 HPLC测定方法 | 第35-36页 |
| 2.17 RED重组进行基因整合 | 第36-38页 |
| 第三章 大肠杆菌生物合成水杨酸的菌株构建与产量优化 | 第38-82页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 T7RNA聚合酶基因的整合 | 第39-45页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.2.1.1 实验菌株 | 第39-40页 |
| 3.2.1.2 实验质粒 | 第40页 |
| 3.2.1.3 实验引物 | 第40页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.2.1 Overlap PCR | 第40-42页 |
| 3.2.2.2 RED基因重组 | 第42-43页 |
| 3.2.2.3 蛋白电泳 | 第43-44页 |
| 3.2.3 实验结果 | 第44-45页 |
| 3.2.4 分析与讨论 | 第45页 |
| 3.3 水杨酸异源基因的整合 | 第45-56页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.3.1.1 实验菌株 | 第45页 |
| 3.3.1.2 实验质粒 | 第45页 |
| 3.3.1.3 培养基 | 第45-46页 |
| 3.3.1.4 实验引物 | 第46页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第46-53页 |
| 3.3.2.1 构建质粒 | 第46-47页 |
| 3.3.2.2 Overlap PCR | 第47-48页 |
| 3.3.2.3 RED基因重组 | 第48-53页 |
| 3.3.2.4 HPLC分析 | 第53页 |
| 3.3.2.5 水杨酸发酵检测 | 第53页 |
| 3.3.3 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.3.4 分析与讨论 | 第56页 |
| 3.4 水杨酸竞争途径的敲除 | 第56-65页 |
| 3.4.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 3.4.1.1 实验质粒 | 第57页 |
| 3.4.1.2 实验菌株 | 第57页 |
| 3.4.1.3 培养基 | 第57页 |
| 3.4.1.4 实验引物 | 第57-58页 |
| 3.4.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 3.4.2.1 构建质粒 | 第58-59页 |
| 3.4.2.2 Overlap PCR | 第59-60页 |
| 3.4.2.3 RED重组 | 第60-62页 |
| 3.4.2.4 HPLC分析 | 第62页 |
| 3.4.2.5 水杨酸发酵检测 | 第62-63页 |
| 3.4.3 实验结果 | 第63-64页 |
| 3.4.4 分析与讨论 | 第64-65页 |
| 3.5 水杨酸上游途径的加强 | 第65-73页 |
| 3.5.1 实验材料 | 第65-67页 |
| 3.5.1.1 实验质粒 | 第65-66页 |
| 3.5.1.2 实验菌株 | 第66页 |
| 3.5.1.3 培养基 | 第66页 |
| 3.5.1.4 实验引物 | 第66-67页 |
| 3.5.2 实验方法 | 第67-72页 |
| 3.5.2.1 Overlap PCR | 第67-68页 |
| 3.5.2.2 RED重组 | 第68-71页 |
| 3.5.2.3 HPLC分析 | 第71页 |
| 3.5.2.4 水杨酸发酵检测 | 第71-72页 |
| 3.5.3 实验结果 | 第72-73页 |
| 3.5.4 分析与讨论 | 第73页 |
| 3.6 水杨酸的代谢偶联 | 第73-80页 |
| 3.6.1 实验材料 | 第73-74页 |
| 3.6.1.1 实验质粒 | 第73-74页 |
| 3.6.1.2 实验菌株 | 第74页 |
| 3.6.1.3 培养基 | 第74页 |
| 3.6.1.4 实验引物 | 第74页 |
| 3.6.2 实验方法 | 第74-78页 |
| 3.6.2.1 Overlap PCR | 第74-76页 |
| 3.6.2.2 RED重组 | 第76-78页 |
| 3.6.2.3 HPLC分析 | 第78页 |
| 3.6.2.4 水杨酸发酵检测 | 第78页 |
| 3.6.3 实验结果 | 第78-80页 |
| 3.6.4 分析与讨论 | 第80页 |
| 3.7 小结 | 第80-82页 |
| 第四章 大肠杆菌生物合成粘糠酸的产量优化 | 第82-86页 |
| 4.1 前言 | 第82页 |
| 4.2 粘糠酸的质粒发酵 | 第82-85页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第82-83页 |
| 4.2.1.1 实验质粒 | 第82页 |
| 4.2.1.2 实验菌株 | 第82页 |
| 4.2.1.3 培养基 | 第82-83页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第83页 |
| 4.2.2.1 电转质粒 | 第83页 |
| 4.2.2.2 HPLC分析 | 第83页 |
| 4.2.2.3 粘糠酸发酵检测 | 第83页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第83-85页 |
| 4.6 小结 | 第85-86页 |
| 第五章 结论与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 作者和导师简介 | 第98-99页 |
| 附件 | 第99-100页 |