| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| 1.1 链霉菌概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 链霉菌基本描述 | 第11页 |
| 1.1.2 链霉菌的生命周期 | 第11-13页 |
| 1.1.3 链霉菌能够产生丰富的次级代谢产物 | 第13页 |
| 1.2 链霉菌次级代谢的分子调控 | 第13-28页 |
| 1.2.1 小分子化合物对抗生素生物合成的调控 | 第14-18页 |
| 1.2.2 参与抗生素生物合成调控的重要蛋白家族 | 第18-24页 |
| 1.2.3 次级代谢产物高产工程菌株的构建 | 第24-28页 |
| 1.3 冰城链霉菌米尔贝霉素的生物合成及调控 | 第28-32页 |
| 1.3.1 米尔贝霉素简介 | 第28-29页 |
| 1.3.2 米尔贝霉素的生物合成研究进展 | 第29-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-55页 |
| 2.1 材料 | 第32-46页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第32-43页 |
| 2.1.2 培养基 | 第43-44页 |
| 2.1.3 缓冲液 | 第44-45页 |
| 2.1.4 抗生素使用浓度 | 第45页 |
| 2.1.5 实验试剂及仪器 | 第45-46页 |
| 2.2. 方法 | 第46-55页 |
| 2.2.1 大肠杆菌及链霉菌质粒的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化(Sambrook et al,2001) | 第47-48页 |
| 2.2.3 链霉菌总DNA的小量制备(Kieser etal,2000) | 第48-49页 |
| 2.2.4 序列分析工具 | 第49页 |
| 2.2.5 链霉菌-大肠杆菌间的接合转移(Kieser et al,2000) | 第49-50页 |
| 2.2.6 链霉菌总RNA提取及转录分析 | 第50-53页 |
| 2.2.7 GUS活性检测(Myronovskyi et al,2011) | 第53-54页 |
| 2.2.8 发酵产物的HPLC分析 将1体积全发酵液（包含菌丝体）用3倍体积的甲醇进行萃取，离心后取上清进行HPLC检测 | 第54-55页 |
| 第三章 米尔贝霉素生物合成调控基因—MILR的研究 | 第55-71页 |
| 3.1 摘要 | 第55页 |
| 3.2 前言 | 第55-57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-68页 |
| 3.3.1 MilR的序列比对分析 | 第57-59页 |
| 3.3.2 milR敲除和互补 | 第59-61页 |
| 3.3.3 milR是米尔贝霉素生物合成的正调控基因 | 第61页 |
| 3.3.4 milR破坏对米尔贝霉素生物合成基因簇转录的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.5 MilR调控靶基因的筛选 | 第62-64页 |
| 3.3.6 qRT-PCR分析milR破坏对米尔贝霉素生物合成基因簇转录的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.7 操作milR表达水平和时序构建米尔贝霉素高产菌株 | 第65-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 MILRAAA域的功能研究 | 第71-77页 |
| 4.1 摘要 | 第71页 |
| 4.2 前言 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与分析 | 第72-75页 |
| 4.3.1 MilR AAA域氨基酸定点突变菌株的构建 | 第72-73页 |
| 4.3.2 MilR AAA域氨基酸定点突变对米尔贝霉素生物合成的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.3 转录水平分析MilR AAA域定点突变对相关基因的影响 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-77页 |
| 总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第92-93页 |
| 博士后期间发表的学术论文 | 第93-94页 |
| 作者简历 | 第94-96页 |
