中文摘要 | 第3-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
符号说明 | 第13-15页 |
前言 | 第15-21页 |
参考文献 | 第18-21页 |
第一部分 人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞株的构建 | 第21-30页 |
1 材料 | 第21-26页 |
1.1 慢病毒颗粒 | 第21页 |
1.2 细胞 | 第21-22页 |
1.3 试剂 | 第22-23页 |
1.4 实验耗材及仪器 | 第23页 |
1.5 细胞培养主要试剂配制 | 第23-24页 |
1.6 western blot主要试剂配制 | 第24-26页 |
2 方法 | 第26-27页 |
2.1 细胞培养 | 第26页 |
2.2 慢病毒感染 | 第26页 |
2.3 倒置荧光显微镜观察荧光表达 | 第26页 |
2.4 western blot | 第26-27页 |
3 结果 | 第27-29页 |
3.1 倒置荧光显微镜下慢病毒感染的人胃癌MGC-803细胞的荧光强度 | 第27-28页 |
3.2 慢病毒感染后人胃癌MGC-803细胞中MASPN蛋白的表达 | 第28-29页 |
4 讨论 | 第29-30页 |
第二部分 南蛇藤提取物对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞的影响 | 第30-44页 |
1 材料 | 第30-33页 |
1.1 药品 | 第30-31页 |
1.2 细胞株 | 第31页 |
1.3 试剂 | 第31-32页 |
1.4 实验耗材及仪器 | 第32页 |
1.5 试剂配制 | 第32-33页 |
2 方法 | 第33-35页 |
2.1 细胞培养 | 第33页 |
2.2 MTT法 | 第33页 |
2.3 倒置显微镜观察细胞形态 | 第33-34页 |
2.4 TUNEL凋亡检测 | 第34页 |
2.5 细胞创伤-愈合实验 | 第34页 |
2.6 Transwell小室迁移实验 | 第34-35页 |
2.7 Transwell小室侵袭实验 | 第35页 |
2.8 统计学处理 | 第35页 |
3 结果 | 第35-42页 |
3.1 COE对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞增殖的影响 | 第35-36页 |
3.2 COE对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞形态学的影响 | 第36-37页 |
3.3 COE对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞凋亡的影响 | 第37-38页 |
3.4 COE对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞迁移能力的影响 | 第38-41页 |
3.5 COE对人胃癌MGC-803/maspin~(++)细胞侵袭能力的影响 | 第41-42页 |
4. 讨论 | 第42-44页 |
第三部分 南蛇藤提取物靶向抑癌基因maspin抑制人胃癌MGC-803细胞转移的分子机制 | 第44-54页 |
1 材料 | 第44-46页 |
1.1 药品 | 第44页 |
1.2 细胞株 | 第44-45页 |
1.3 试剂 | 第45-46页 |
1.4 实验耗材及仪器 | 第46页 |
1.5 western blot试剂配制 | 第46页 |
2 方法 | 第46-48页 |
2.1 细胞总蛋白提取 | 第46-47页 |
2.2 BCA蛋白定量 | 第47页 |
2.3 western blot分析 | 第47-48页 |
2.3.1 SDS-PAGE电泳 | 第47页 |
2.3.2 转膜及封闭 | 第47-48页 |
2.3.3 抗体杂交 | 第48页 |
2.3.4 化学发光 | 第48页 |
3 结果 | 第48-52页 |
3.1 COE对MASPIN蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
3.2 COE对凋亡相关蛋白bax、Bcl-2及Bcl-2L12表达的影响 | 第49-50页 |
3.3 COE对侵袭转移相关蛋白uPA及MMP-2,MMP-9表达的影响 | 第50页 |
3.4 COE对PI3K/AKT/mTOR及MAPK信号通路的影响 | 第50-52页 |
4. 讨论 | 第52-54页 |
参考文献 | 第54-58页 |
文献综述 | 第58-64页 |
参考文献 | 第61-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第65-66页 |