中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
第一章 文献综述 | 第9-19页 |
1 水稻条纹病毒研究概况 | 第9-13页 |
1.1 寄主范围与病害症状 | 第9-10页 |
1.2 水稻条纹病毒传毒介体 | 第10-11页 |
1.3 水稻条纹病毒与灰飞虱互作研究进展 | 第11-12页 |
1.4 水稻条纹病毒分子生物学研究进展 | 第12-13页 |
2 病毒编码沉默抑制子研究进展 | 第13-18页 |
2.1 RNA沉默研究概况 | 第13-15页 |
2.2 RNA沉默抗病毒机制研究进展 | 第15-16页 |
2.3 病毒拮抗RNA沉默策略研究进展 | 第16-18页 |
3 研究目的和意义 | 第18-19页 |
第二章 利用酵母双杂交系统筛选灰飞虱体内与RSV-NS3互作蛋白因子 | 第19-38页 |
1 材料与方法 | 第20-29页 |
1.1 材料 | 第20-21页 |
1.2 方法 | 第21-29页 |
2 结果与分析 | 第29-34页 |
2.1 R-NS3的RT-PCR扩增 | 第29-30页 |
2.2 R-NS3基因的T-A克隆 | 第30页 |
2.3 pGBKT7-NS3载体构建 | 第30-31页 |
2.4 诱饵质粒的毒性和自激活实验 | 第31页 |
2.5 筛选阳性酵母菌株 | 第31-32页 |
2.6 PCR验证插入片段大小 | 第32-34页 |
3 小结与讨论 | 第34-38页 |
第三章 灰飞虱RNaseⅢ与RSV的NS3互作验证 | 第38-44页 |
1 材料与方法 | 第38-39页 |
1.1 材料 | 第38页 |
1.2 方法 | 第38-39页 |
2 结果与分析 | 第39-42页 |
2.1 RNaseⅢ的PCR扩增与克隆 | 第39-40页 |
2.2 RNaseⅢ的酵母表达载体的构建 | 第40-41页 |
2.3 灰飞虱中RNaseⅢ蛋白与RSV-NS3、RSV-NS2蛋白的互作检测 | 第41-42页 |
3 小结与讨论 | 第42-44页 |
第四章 RNaseⅢ的切割活性分析 | 第44-54页 |
1 材料与方法 | 第44-48页 |
1.1 材料 | 第44-45页 |
1.2 方法 | 第45-48页 |
2 结果与分析 | 第48-53页 |
2.1 pET32a-RNaseⅢ原核表达载体构建 | 第48-49页 |
2.2 RNaseⅢ融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第49-50页 |
2.3 双链dsGFP的合成 | 第50-51页 |
2.4 RNaseⅢ的蛋白功能活性分析 | 第51-52页 |
2.5 RNaseⅢ蛋白活性有效浓度分析 | 第52-53页 |
3 小结 | 第53-54页 |
第五章 NS3对RNaseⅢ功能的影响 | 第54-61页 |
1 材料和方法 | 第54-55页 |
1.1 材料 | 第54页 |
1.2 方法 | 第54-55页 |
2 结果和分析 | 第55-59页 |
2.1 pET32a-NS3原核表达载体构建 | 第55-56页 |
2.2 NS3蛋白纯化分析 | 第56-57页 |
2.3 NS3对RNaseⅢ功能的影响分析 | 第57-58页 |
2.4 灰飞虱胚胎体系内Dicer酶活的分析 | 第58-59页 |
2.5 NS3对灰飞虱胚胎体系内Dicer酶活性功能的影响 | 第59页 |
3 小结与讨论 | 第59-61页 |
参考文献 | 第61-66页 |
附录Ⅰ 常用分子生物学仪器 | 第66-67页 |
附录Ⅱ 常用试剂配方 | 第67-71页 |
附录Ⅲ 载体图谱 | 第71-74页 |
攻读硕士期间发表论文 | 第74-75页 |
致谢 | 第75-77页 |