摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略语索引 | 第14-15页 |
第一章 绪论 | 第15-43页 |
第一节 过敏反应 | 第15-28页 |
1.1 过敏性疾病 | 第15-22页 |
1.1.1 常见过敏性疾病 | 第15-18页 |
1.1.2 常见过敏原 | 第18-20页 |
1.1.3 常见过敏性疾病的预防和治疗现状 | 第20-22页 |
1.2 肥大细胞 | 第22-27页 |
1.2.1 肥大细胞基本特点 | 第22-25页 |
1.2.2 肥大细胞参与Ⅰ型超敏反应 | 第25-27页 |
1.3 与过敏反应相关的信号通路 | 第27-28页 |
1.3.1 MAPK信号通路 | 第27-28页 |
第二节 Septin蛋白 | 第28-35页 |
2.1 Septin蛋白的分类与结构特点 | 第28-30页 |
2.2 Septin蛋白的生理功能 | 第30-35页 |
2.2.1 Septin调控酵母出芽过程 | 第30-31页 |
2.2.2 Septin调控微管蛋白网络 | 第31页 |
2.2.3 Septin在细菌感染中的作用 | 第31-35页 |
2.3 Septin11与本研究的关系 | 第35页 |
第三节 基因编辑技术 | 第35-43页 |
3.1 基因编辑技术概述 | 第36页 |
3.2 基因编辑技术的发展 | 第36-37页 |
3.3 基因编辑分子工具的分类 | 第37-41页 |
3.3.1 ZFN技术 | 第37-38页 |
3.3.2 TALEN技术 | 第38-39页 |
3.3.3 CRISPR/Cas系统 | 第39-41页 |
3.4 基因编辑在本研究中的应用 | 第41-43页 |
第二章 P815-Septin11-KO质粒和稳定细胞系的构建 | 第43-67页 |
第一节 实验方法 | 第43-56页 |
1.1 细胞培养 | 第43-46页 |
1.2 质粒构建 | 第46-48页 |
1.3 细胞转染、筛选、挑单克隆 | 第48-50页 |
1.3.1 细胞转染 | 第48-49页 |
1.3.2 细胞筛选 | 第49-50页 |
1.3.3 挑单克隆 | 第50页 |
1.4 WB验证 | 第50-53页 |
1.5 基因验证 | 第53-56页 |
第二节 实验结果 | 第56-64页 |
2.1 Septin11在P815肥大细胞中表达丰度较高 | 第56-57页 |
2.2 P815-Septin11-KO质粒构建成功 | 第57-58页 |
2.3 P815-Septin11-KO稳定细胞系构建成功 | 第58-64页 |
2.3.1 WB检测P815-Septin11-KO稳定细胞系 | 第58-61页 |
2.3.2 基因组水平检测细胞P815-Septin11-KO稳定系 | 第61-64页 |
第三节 实验小结 | 第64-67页 |
第三章 Septin11对肥大细胞活化的影响 | 第67-87页 |
第一节 实验方法 | 第67-72页 |
1.1 CCK8检测细胞增殖 | 第67-68页 |
1.2 细胞粘附实验 | 第68-69页 |
1.3 甲苯胺蓝染色 | 第69-70页 |
1.4 底物显色法检测β-氨基己糖苷酶 | 第70页 |
1.5 Q-PCR检测mRNA水平 | 第70-71页 |
1.6 ELISA检测白介素水平 | 第71-72页 |
1.7 激光共聚焦显微镜检测Ca~(2+)内流 | 第72页 |
1.8 Septin11对ERK信号通路的影响 | 第72页 |
第二节 实验结果 | 第72-84页 |
2.1 细胞增殖和细胞粘附实验 | 第72-75页 |
2.1.1 细胞增殖实验 | 第73页 |
2.1.2 细胞粘附实验 | 第73-75页 |
2.2 甲苯胺蓝染色 | 第75-77页 |
2.3 mRNA水平检测肥大细胞活化情况 | 第77-79页 |
2.4 蛋白水平检测肥大细胞活化情况 | 第79-81页 |
2.5 激光共聚焦显微镜检测Ca~(2+)流 | 第81-82页 |
2.6 Septin11对ERK信号通路的影响 | 第82-84页 |
第三节 实验小结 | 第84-87页 |
第四章 总结与展望 | 第87-89页 |
致谢 | 第89-93页 |
参考文献 | 第93-101页 |
附录A(攻读学位期间发表论文目录) | 第101-123页 |
附录B (实验材料) | 第123-129页 |
附录C (主要实验试剂配方) | 第129-130页 |