| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| 1.1 干扰素诱导跨膜蛋白3基因 | 第8-11页 |
| 1.1.1 IFITM基因家族 | 第8-9页 |
| 1.1.2 IFITM基因家族的生物活性 | 第9-10页 |
| 1.1.3 猪IFITM3基因 | 第10-11页 |
| 1.2 Piggy Bac转座子 | 第11-12页 |
| 1.3 LPS/TLR4信号通路 | 第12-13页 |
| 1.4 展望 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-30页 |
| 3.1 试验材料 | 第16页 |
| 3.2 试剂 | 第16页 |
| 3.3 仪器 | 第16页 |
| 3.4 试剂配制 | 第16-18页 |
| 3.4.1 核酸电泳试剂 | 第16页 |
| 3.4.2 蛋白电泳试剂 | 第16-17页 |
| 3.4.3 Western Blot试剂 | 第17页 |
| 3.4.4 其他试剂配制 | 第17-18页 |
| 3.5 猪IFITM3基因的克隆及组织分布 | 第18-21页 |
| 3.5.1 猪IFITM3基因克隆 | 第18-21页 |
| 3.5.2 组织分布 | 第21页 |
| 3.6 猪IFITM3基因原核表达 | 第21-24页 |
| 3.6.1 猪IFITM3基因扩增和鉴定 | 第21-22页 |
| 3.6.2 酶切产物纯化 | 第22页 |
| 3.6.3 T4 DNA连接酶连接反应 | 第22页 |
| 3.6.4 阳性克隆菌的筛选与鉴定 | 第22页 |
| 3.6.5 IFITM3基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第22-23页 |
| 3.6.6 融合表达产物的可溶性鉴定 | 第23页 |
| 3.6.7 Western Blot分析 | 第23-24页 |
| 3.7 真核表达载体PB-IFITM3构建 | 第24-26页 |
| 3.7.1 引物设计及目的基因扩增 | 第24页 |
| 3.7.2 PCR产物胶回收 | 第24页 |
| 3.7.3 PB载体和胶回收产物双酶切 | 第24-25页 |
| 3.7.4 酶切产物纯化 | 第25页 |
| 3.7.5 T4 DNA连接酶连接反应 | 第25页 |
| 3.7.6 连接反应产物转化感受态细胞 | 第25页 |
| 3.7.7 PB-IFITM3鉴定 | 第25-26页 |
| 3.7.8 质粒中提 | 第26页 |
| 3.8 PB-IFITM3载体在PK15细胞中的表达 | 第26-30页 |
| 3.8.1 稳定细胞系筛选 | 第26页 |
| 3.8.2 IFITM3基因过表达检测 | 第26-28页 |
| 3.8.3 猪IFITM3基因过表达对 LPS/TLR4 信号通路的影响 | 第28-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-40页 |
| 4.1 猪IFITM3基因的克隆与组织分布 | 第30-31页 |
| 4.1.1 猪IFITM3基因克隆 | 第30-31页 |
| 4.1.2 组织分布 | 第31页 |
| 4.2 猪IFITM3基因原核表达 | 第31-34页 |
| 4.2.1 p MD19-IFITM3载体(Sal I、Not I)构建 | 第31-32页 |
| 4.2.2 p ET-21b-IFITM3重组载体构建 | 第32-33页 |
| 4.2.3 猪IFITM3基因的诱导表达 | 第33-34页 |
| 4.3 真核表达载体PB-IFITM3构建 | 第34-35页 |
| 4.4 IFITM3在PK15细胞中的表达 | 第35-40页 |
| 4.4.1 稳定细胞系筛选 | 第35-36页 |
| 4.4.2 IFITM3基因过表达 | 第36页 |
| 4.4.3 IFITM3基因对LPS/TLR4信号通路的影响 | 第36-40页 |
| 5 结论与讨论 | 第40-43页 |
| 5.1 讨论 | 第40-41页 |
| 5.1.1 猪IFITM3基因克隆、组织分布与原核表达 | 第40页 |
| 5.1.2 真核表达载体PB-IFITM3的应用 | 第40-41页 |
| 5.1.3 猪IFITM3基因在PK15细胞的表达 | 第41页 |
| 5.2 结论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 英文摘要 | 第48-49页 |
