| 中文摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第17-41页 |
| 1.1 磁性纳米颗粒 | 第18-20页 |
| 1.1.1 磁性纳米颗粒的性质 | 第18-19页 |
| 1.1.2 磁性纳米颗粒的制备方法 | 第19-20页 |
| 1.2 化学发光技术 | 第20-24页 |
| 1.2.1 化学发光免疫分析技术的基本原理 | 第20-21页 |
| 1.2.2 化学发光免疫分析法的类型 | 第21-24页 |
| 1.2.2.1 化学发光免疫分析 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 化学发光酶免疫分析 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 电化学发光免疫分析 | 第23页 |
| 1.2.3.4 其他化学发光体系 | 第23-24页 |
| 1.3 肝炎的分子生物学鉴定方法 | 第24-27页 |
| 1.3.1 实时荧光PCR技术 | 第24-25页 |
| 1.3.2 基因芯片技术 | 第25页 |
| 1.3.3 荧光显微镜检测 | 第25页 |
| 1.3.4 基于纳米材料的生物传感器技术 | 第25-27页 |
| 1.3.5 基于Luminol-H_2O_2-HRP化学发光体系的分子检测 | 第27页 |
| 1.4 磁性纳米颗粒在分子检测研究的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 核酸体外扩增检测技术 | 第28-31页 |
| 1.5.1 PCR扩增技术 | 第28页 |
| 1.5.2 等温扩增技术 | 第28-30页 |
| 1.5.3 全基因组扩增技术 | 第30-31页 |
| 1.6 问题与展望 | 第31页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第31-33页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-41页 |
| 第二章 Fe_3O_4磁性纳米颗粒的制备与性能表征 | 第41-55页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第42-44页 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.1.1 实验试剂 | 第42页 |
| 2.2.1.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2.2.2.1 Fe_3O_4磁性纳米颗粒的制备 | 第43页 |
| 2.2.2.2 Fe_3O_4@SiO_2磁性纳米颗粒的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.2.3 磁性纳米颗粒的表征 | 第44页 |
| 2.2.2.4 以Fe_3O_4@SiO_2纳米粒子为吸附剂从大肠杆菌中分离核酸 | 第44页 |
| 2.2.2.5 PCR验证实验 | 第44页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第44-50页 |
| 2.3.1 TEM分析 | 第44-45页 |
| 2.3.2 扫描电镜分析(SEM) | 第45-46页 |
| 2.3.3 Fe_3O_4/SiO_2磁性纳米颗粒的FT-IR光谱图 | 第46-47页 |
| 2.3.4 Fe_3O_4/SiO_2磁性纳米颗粒的磁滞回归曲线 | 第47页 |
| 2.3.5 磁性纳米颗粒的粒径分析 | 第47-48页 |
| 2.3.6 核酸提取的初步尝试 | 第48-49页 |
| 2.3.7 PCR验证分析 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 第三章 FE3O4@SIO2磁性纳米颗粒在不同来源的DNA提取中的应用研究 | 第55-66页 |
| 3.1 前言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.3.1 基于磁分离提取全血DNA基本步骤 | 第57-58页 |
| 3.3.2 基因组DNA的提取与测定 | 第58页 |
| 3.3.3 基于MNPs的不同来源DNA的PCR验证 | 第58-59页 |
| 3.3.3.1 从大肠杆菌JM 109中提取基因组DNA的16SrDNA基因PCR扩增 | 第58页 |
| 3.3.3.2 从酵母中提取基因组DNA的18SrDNA基因PCR扩增 | 第58-59页 |
| 3.3.3.3 全血基因组DNA GADPH基因的PCR扩增 | 第59页 |
| 3.3.3.4 HBV DNA的PCR扩增实验 | 第59页 |
| 3.3.4 限制性酶切鉴定分析 | 第59页 |
| 3.4 结果与分析 | 第59-62页 |
| 3.4.1 从不同来源提取基因组DNA | 第60-61页 |
| 3.4.2 PCR验证实验 | 第61-62页 |
| 3.4.3 限制性内切酶法分析提取的基因组核酸 | 第62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-66页 |
| 第四章 基于磁性复合颗粒的化学发光乙肝核酸检测方法研究 | 第66-77页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第66-71页 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 | 第66-67页 |
| 4.2.1.1 实验试剂 | 第66-67页 |
| 4.2.1.2 实验仪器及耗材 | 第67页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第67-71页 |
| 4.2.2.1 HBV-DNA的磁性颗粒提取法 | 第67-68页 |
| 4.2.2.2 化学发光检测 | 第68页 |
| 4.2.2.3 生物素MDNA片段的謂 | 第68-70页 |
| 4.2.2.4 最佳磁性复合颗粒用量 | 第70页 |
| 4.2.2.5 磁性颗粒的最佳羧基化浓度修饰实验 | 第70页 |
| 4.2.2.6 最佳探针修饰浓度实验 | 第70页 |
| 4.2.2.7 最佳杂交时间的实验 | 第70页 |
| 4.2.2.8 不同浓度扩增产物的检测 | 第70-71页 |
| 4.3 结果与分析 | 第71-75页 |
| 4.3.1 扩增序列的凝胶电泳图片 | 第71页 |
| 4.3.2 特异性检测 | 第71-72页 |
| 4.3.3 磁性纳米颗粒用量的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.4 羧基化浓度的影响 | 第73页 |
| 4.3.5 探针浓度对化学发光强度的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.6 杂交时间对化学发光的影响 | 第74页 |
| 4.3.7 梯度稀释的扩增产物的检测 | 第74-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75页 |
| 参考文献 | 第75-77页 |
| 第五章 基于磁性纳米颗粒和全基因组扩增的全血化学发光检测技术研究 | 第77-83页 |
| 5.1 前言 | 第77-78页 |
| 5.2 材料与方法 | 第78-80页 |
| 5.2.1 实验试剂与仪器 | 第78-79页 |
| 5.2.1.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 5.2.1.2 实验仪器 | 第79页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第79-80页 |
| 5.2.2.1 全血DNA提取实验 | 第79页 |
| 5.2.2.2 全基因组扩增(WGA)与生物素dUTP标记 | 第79页 |
| 5.2.2.3 WGA产物凝胶电泳 | 第79页 |
| 5.2.2.4 HBV基因探针与MNPs的结合 | 第79页 |
| 5.2.2.5 HBV基因的化学发光检测实验 | 第79-80页 |
| 5.3 结果与分析 | 第80-82页 |
| 5.3.1 全血基因组DNA的提取 | 第80-81页 |
| 5.3.2 序列特异性HBV DNA的检测实验 | 第81-82页 |
| 5.4 本章小结 | 第82页 |
| 参考文献 | 第82-83页 |
| 第六章 基于环介导等温扩增(LAMP)及化学发光技术的乙肝和丙肝的分子检测方法研究 | 第83-96页 |
| 6.1 引言 | 第83-84页 |
| 6.2 材料与方法 | 第84-87页 |
| 6.2.1 实验材料与仪器 | 第84-86页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第86-87页 |
| 6.2.2.1 HBV-DNA和HCV-RNA提取 | 第86页 |
| 6.2.2.2 LAMP和RT-LAMP扩增及琼脂糖凝胶电泳验证 | 第86页 |
| 6.2.2.3 HBV和HCV基因化学发光检测 | 第86-87页 |
| 6.3 结果与分析 | 第87-91页 |
| 6.3.1 HBV-DNA和HCV-RNA提取 | 第87-88页 |
| 6.3.2 LAMP扩增温度优化 | 第88页 |
| 6.3.3 HBV和HCV基因化学发光检测 | 第88-89页 |
| 6.3.4 探针浓度对化学发光的影响 | 第89页 |
| 6.3.5 杂交温度对化学发光的影响 | 第89-90页 |
| 6.3.6 杂交时间对化学发光的影响 | 第90页 |
| 6.3.7 灵敏度检验 | 第90-91页 |
| 6.4 本章小结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 第七章 基于聚苯乙烯纳米颗粒和化学发光的乙肝表面抗原的分子检测方法研究 | 第96-111页 |
| 7.1 引言 | 第96-97页 |
| 7.2 材料与方法 | 第97-100页 |
| 7.2.1 化学试剂和材料 | 第97页 |
| 7.2.2 主要试剂 | 第97-98页 |
| 7.2.3 实验仪器 | 第98页 |
| 7.2.4 实验方法 | 第98-100页 |
| 7.2.4.1 氨基功能化聚苯乙烯微球的制备 | 第98-99页 |
| 7.2.4.2 醛基化聚苯乙烯微球的制备 | 第99页 |
| 7.2.4.3 免疫聚苯乙烯纳米颗粒的制备 | 第99页 |
| 7.2.4.4 免疫聚苯乙烯纳米颗粒的非特异性处理封闭 | 第99-100页 |
| 7.2.4.5 乙型肝炎表面抗原的免疫检测 | 第100页 |
| 7.2.4.6 灵敏性检测实验 | 第100页 |
| 7.3 表征 | 第100-101页 |
| 7.3.1 颗粒形态 | 第101页 |
| 7.3.2 表面化学分析 | 第101页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第101-106页 |
| 7.4.1 氨基化PS微球的制备 | 第101-103页 |
| 7.4.2 PS微球的表面特性 | 第103-104页 |
| 7.4.3 功能化的PS微球和化学发光法检测乙型肝炎表面抗原 | 第104页 |
| 7.4.4 特异性实验 | 第104-105页 |
| 7.4.5 检测限的确定 | 第105-106页 |
| 7.5 本章小结 | 第106页 |
| 参考文献 | 第106-111页 |
| 第八章 总结与展望 | 第111-113页 |
| 8.1 论文总结 | 第111-112页 |
| 8.2 下一步工作需要解决的问题 | 第112-113页 |
| 博士期间的科研成果 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
