| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一部分 房水miRNA表达与临床CMT相关性研究 | 第10-15页 |
| 1 实验材料 | 第10-11页 |
| 1.1 临床标本的来源 | 第10页 |
| 1.2 实验试剂 | 第10页 |
| 1.3 实验耗材 | 第10页 |
| 1.4 实验仪器 | 第10-11页 |
| 2 实验方法 | 第11-12页 |
| 2.1 临床OCT检查 | 第11页 |
| 2.2 临床标本的采集 | 第11页 |
| 2.3 临床标本的检测(miRFLP直接测定法) | 第11页 |
| 2.4 统计学分析 | 第11-12页 |
| 3 试验结果 | 第12-14页 |
| 3.1 患者CMT情况 | 第12页 |
| 3.2 房水各miRNA表达情况 | 第12-14页 |
| 3.3 相关性分析 | 第14页 |
| 4 小结 | 第14-15页 |
| 第二部分 miR-17-5p上调对TGF-β2及GDF11表达的影响 | 第15-28页 |
| 1 试验材料 | 第15-17页 |
| 1.1 实验细胞系 | 第15页 |
| 1.2 实验试剂 | 第15页 |
| 1.3 实验耗材 | 第15-16页 |
| 1.4 实验仪器 | 第16页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.1 细胞培养步骤 | 第17-18页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第17页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第17-18页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第18页 |
| 2.1.4 细胞计数 | 第18页 |
| 2.2 选择实验的目的基因及蛋白 | 第18页 |
| 2.3 实验分组 | 第18页 |
| 2.4 转染 | 第18-19页 |
| 2.5 qRT-PCT检测miR-17-5p的表达 | 第19-21页 |
| 2.5.1 miRNA引物 | 第19页 |
| 2.5.2 总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.5.3 miRNA逆转录 | 第20页 |
| 2.5.4 qRT-PCT检测 | 第20-21页 |
| 2.6 细胞活性检测(CCK8法) | 第21页 |
| 2.7 qRT-PCR检测TGFβ2及GDF11的mRNA表达 | 第21-22页 |
| 2.7.1 PCR引物 | 第21-22页 |
| 2.7.2 总RNA提取 | 第22页 |
| 2.7.3 反转录反应 | 第22页 |
| 2.7.4 qRT-PCR检测 | 第22页 |
| 2.7.5 溶解曲线 | 第22页 |
| 2.8 WesternBlot检测TGF-β2及GDF11蛋白的表达 | 第22-24页 |
| 2.8.1 蛋白样品制备 | 第22-23页 |
| 2.8.2 配制SDS-PAGE凝胶 | 第23页 |
| 2.8.3 电泳 | 第23-24页 |
| 2.8.4 湿法转膜 | 第24页 |
| 2.8.5 发光显影 | 第24页 |
| 2.9 统计学分析 | 第24页 |
| 3 试验结果 | 第24-27页 |
| 3.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 3.2 qRT-PCR检测miR-17-5p转染效率 | 第25页 |
| 3.3 细胞活性检测(CCK8) | 第25页 |
| 3.4 qRT-PCR检测TGF-β2及GDF11的mRNA表达 | 第25-26页 |
| 3.5 WesternBlot检测TGF-β2及GDF11的蛋白表达 | 第26-27页 |
| 4 小结 | 第27-28页 |
| 讨论 | 第28-31页 |
| 结论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-36页 |
| 综述 | 第36-51页 |
| 综述参考文献 | 第45-51页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第51-52页 |
| 缩略词表 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
