摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7页 |
英文缩略表 | 第11-12页 |
第一章 引言 | 第12-20页 |
1.1 苹果产业现状 | 第12页 |
1.2 苹果褪绿叶斑病毒研究进展 | 第12-15页 |
1.2.1 ACLSV的发现与发生 | 第12页 |
1.2.2 ACLSV的寄主范围和侵染症状 | 第12-13页 |
1.2.3 ACLSV的分类地位 | 第13页 |
1.2.4 ACLSV的分子生物学特性 | 第13-14页 |
1.2.5 植物病毒的检测方法 | 第14-15页 |
1.2.6 ACLSV的防治 | 第15页 |
1.3 RT-LAMP检测技术研究概况 | 第15-17页 |
1.3.1 LAMP反应原理 | 第15-16页 |
1.3.2 LAMP反应结果判断 | 第16页 |
1.3.3 LAMP反应的应用 | 第16-17页 |
1.4 植物RNA病毒侵染性克隆研究进展 | 第17-18页 |
1.4.1 植物RNA病毒侵染性克隆制备方法 | 第17-18页 |
1.5 研究的目的和意义 | 第18-20页 |
第二章 苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测方法的建立 | 第20-34页 |
2.1 材料与试剂 | 第20页 |
2.1.1 试验材料 | 第20页 |
2.1.2 试验试剂和器材 | 第20页 |
2.2 试验方法 | 第20-24页 |
2.2.1 总RNA提取 | 第20-21页 |
2.2.2 引物设计和合成 | 第21页 |
2.2.3 RT-PCR检测 | 第21-22页 |
2.2.4 RT-LAMP检测方法建立 | 第22-23页 |
2.2.5 RT-LAMP特异性验证 | 第23页 |
2.2.6 RT-PCR和RT-LAMP灵敏性检测 | 第23-24页 |
2.2.7 ACLSV田间样品检测 | 第24页 |
2.3 结果 | 第24-31页 |
2.3.1 RT-LAMP引物筛选 | 第24页 |
2.3.2 RT-LAMP反应体系优化 | 第24-28页 |
2.3.3 最适反应条件 | 第28页 |
2.3.4 特异性检测 | 第28-29页 |
2.3.5 RT-PCR和RT-LAMP灵敏性检测 | 第29-30页 |
2.3.6 田间疑似病株检测 | 第30-31页 |
2.4 讨论 | 第31-34页 |
第三章 苹果褪绿叶斑病毒辽宁分离物生物学和基因组研究 | 第34-45页 |
3.1 材料与试剂 | 第34页 |
3.1.1 材料 | 第34页 |
3.1.2 试剂、克隆载体、菌株和引物 | 第34页 |
3.2 试验方法 | 第34-40页 |
3.2.1 样品总RNA提取 | 第34页 |
3.2.2 检测引物和基因组扩增引物设计 | 第34-35页 |
3.2.3 RT-PCR检测病毒 | 第35-36页 |
3.2.4 ACLSV基因组扩增 | 第36-38页 |
3.2.5 PCR产物的纯化、克隆及序列测定 | 第38页 |
3.2.6 基因组结构、序列一致性及系统发育分析 | 第38-39页 |
3.2.7 重组分析 | 第39页 |
3.2.8 草本和木本寄主鉴定 | 第39-40页 |
3.3 结果分析 | 第40-43页 |
3.3.1 XC-HF带毒情况和ACLSV基因组扩增 | 第40页 |
3.3.2 ACLSV基因组结构特征 | 第40-41页 |
3.3.3 序列一致性和系统发育分析 | 第41-42页 |
3.3.4 ACLSVXC-HF是一个自然重组体 | 第42-43页 |
3.3.5 生物学实验结果 | 第43页 |
3.4 讨论 | 第43-45页 |
第四章 苹果褪绿叶斑病毒侵染性克隆载体构建 | 第45-50页 |
4.1 材料与试剂 | 第45页 |
4.1.1 材料 | 第45页 |
4.1.2 试剂 | 第45页 |
4.2 试验方法 | 第45-47页 |
4.2.1 引物设计 | 第45-46页 |
4.2.2 基因组片段克隆、线性化pCB | 第46页 |
4.2.3 载体构建 | 第46-47页 |
4.2.4 农杆菌转化 | 第47页 |
4.2.5 农杆菌接种 | 第47页 |
4.3 试验结果 | 第47-48页 |
4.3.1 ACLSV基因组片段扩增及线性化pCB | 第47-48页 |
4.3.2 ACLSV侵染性克隆载体构建 | 第48页 |
4.4 讨论 | 第48-50页 |
第五章 全文结论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-56页 |
致谢 | 第56-57页 |
作者简历 | 第57页 |