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桑树花青素相关基因的克隆及表达和ANS基因表达载体的构建

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第1章 绪论第16-23页
    1.1 研究的目的和意义第16页
    1.2 花青素相关基因的研究现状第16-19页
        1.2.1 花青素生理活性的研究进展第16-17页
        1.2.2 查尔酮合成酶(chalconesynthase,CHS)的研究进展第17-18页
        1.2.3 翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的研究进展第18-19页
        1.2.4 花青素合成酶(ANS)的研究进展第19页
    1.3 抑制消减杂交技术(SSH)第19-21页
        1.3.1 抑制消减杂交的基本原理及主要流程第19-20页
        1.3.2 抑制性消减杂交技术在实验中的应用第20-21页
    1.4 本课题的研究内容第21-23页
        1.4.1 桑树紫芽与绿芽的消减抑制杂交第21页
        1.4.2 桑树两个花青素相关基因的全长克隆及胁迫情况下的表达分析第21-22页
        1.4.3 桑树ANS基因的表达载体构建第22-23页
第2章 桑树紫芽与绿芽的抑制消减杂交第23-37页
    2.1 实验材料第23-24页
        2.1.1 材料和试剂第23-24页
        2.1.2 主要仪器第24页
    2.2 实验方法第24-32页
        2.2.1 桑树总RNA提取第24-25页
        2.2.2 mRNA的分离纯化第25页
        2.2.3 抑制性消减杂交第25-32页
    2.3 结果分析第32-35页
        2.3.1 总RNA质量检测第32-33页
        2.3.2 消减杂交产物的PCR扩增第33-34页
        2.3.3 消减杂交部分阳性克隆的同源性分析第34页
        2.3.4 抑制性消减杂交插入片段的PCR验证第34-35页
    2.4 讨论与小结第35-37页
第3章 桑树花青素相关基因的克隆及其表达分析第37-60页
    3.1 实验材料及仪器第37页
        3.1.1 实验材料第37页
        3.1.2 主要试剂及仪器第37页
    3.2 实验方法第37-44页
        3.2.1 桑树总RNA的提取(同 2.2.1)第37页
        3.2.2 桑树TCTP基因扩增相关特异性引物设计第37-38页
        3.2.3 桑树CHS3基因扩增相关特异性引物设计第38-39页
        3.2.4 逆转录PCR:同 2.2.3.14第39页
        3.2.5 CHS3基因已知部分序列验证第39页
        3.2.6 CHS3和TCTP基因 3'末端cDNA的克隆第39-40页
        3.2.7 CHS3和TCTP基因 5'末端cDNA的克隆第40-42页
        3.2.8 CHS3和TCTP基因的生物学信息分析第42页
        3.2.9 桑树CHS3和TCTP基因在不同组织间及高温和低温胁迫下的表达分析第42-44页
    3.3 结果与分析第44-58页
        3.3.1 桑树总RNA的提取及检测第44页
        3.3.2 CHS3和TCTP基因的克隆及检测第44-48页
        3.3.3 Ma-CHS3和Ma-TCTP的全长cDNA序列分析第48页
        3.3.4 Ma-CHS3 和 Ma-TCTP 基因编码氨基酸的同源比对及构建系统进化树第48-52页
        3.3.5 Ma-CHS3 和 Ma-TCTP 基因编码蛋白疏水/亲水性的预测和分析第52-54页
        3.3.6 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白跨膜分析第54-55页
        3.3.7 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白的信号肽序列分析第55-56页
        3.3.8 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白的磷酸化位点分析第56页
        3.3.9 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因在高温和低温胁迫下的表达分析第56-58页
    3.4 小结与讨论第58-60页
第4章 桑树花青素合成酶基因的表达载体构建第60-68页
    4.1 实验材料及试剂第60-62页
        4.1.1 实验材料第60页
        4.1.2 主要试剂第60页
        4.1.3 主要溶液配置方法第60-62页
    4.2 实验方法第62-65页
        4.2.1 桑树总RNA的提取(同 2.2.1)第62页
        4.2.2 逆转录PCR:同 2.2.3.14第62页
        4.2.3 桑树ANS基因扩增相关特异性引物设计第62页
        4.2.4 桑树ANS基因的全长克隆第62页
        4.2.5 扩增产物的回收与纯化第62页
        4.2.6 ANS基因片段的连接与转化第62页
        4.2.7 ANS基因片段的阳性克隆的鉴定及测序第62页
        4.2.8 质粒抽提第62-63页
        4.2.9 重组载体的构建第63-65页
        4.2.10农杆菌感受态的转化第65页
    4.3 结果与分析第65-68页
        4.3.1 桑树ANS基因的克隆及序列验证第65-66页
        4.3.2 构建载体的验证第66-68页
结论与展望第68-70页
参考文献第70-74页
攻读学位期间发表的学术论文第74-75页
致谢第75页

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