| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第16-23页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第16页 |
| 1.2 花青素相关基因的研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.1 花青素生理活性的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 查尔酮合成酶(chalconesynthase,CHS)的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.3 翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2.4 花青素合成酶(ANS)的研究进展 | 第19页 |
| 1.3 抑制消减杂交技术（SSH） | 第19-21页 |
| 1.3.1 抑制消减杂交的基本原理及主要流程 | 第19-20页 |
| 1.3.2 抑制性消减杂交技术在实验中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第21-23页 |
| 1.4.1 桑树紫芽与绿芽的消减抑制杂交 | 第21页 |
| 1.4.2 桑树两个花青素相关基因的全长克隆及胁迫情况下的表达分析 | 第21-22页 |
| 1.4.3 桑树ANS基因的表达载体构建 | 第22-23页 |
| 第2章 桑树紫芽与绿芽的抑制消减杂交 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 桑树总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 mRNA的分离纯化 | 第25页 |
| 2.2.3 抑制性消减杂交 | 第25-32页 |
| 2.3 结果分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 总RNA质量检测 | 第32-33页 |
| 2.3.2 消减杂交产物的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.3 消减杂交部分阳性克隆的同源性分析 | 第34页 |
| 2.3.4 抑制性消减杂交插入片段的PCR验证 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第35-37页 |
| 第3章 桑树花青素相关基因的克隆及其表达分析 | 第37-60页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 3.2.1 桑树总RNA的提取（同 2.2.1） | 第37页 |
| 3.2.2 桑树TCTP基因扩增相关特异性引物设计 | 第37-38页 |
| 3.2.3 桑树CHS3基因扩增相关特异性引物设计 | 第38-39页 |
| 3.2.4 逆转录PCR：同 2.2.3.14 | 第39页 |
| 3.2.5 CHS3基因已知部分序列验证 | 第39页 |
| 3.2.6 CHS3和TCTP基因 3'末端cDNA的克隆 | 第39-40页 |
| 3.2.7 CHS3和TCTP基因 5'末端cDNA的克隆 | 第40-42页 |
| 3.2.8 CHS3和TCTP基因的生物学信息分析 | 第42页 |
| 3.2.9 桑树CHS3和TCTP基因在不同组织间及高温和低温胁迫下的表达分析 | 第42-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-58页 |
| 3.3.1 桑树总RNA的提取及检测 | 第44页 |
| 3.3.2 CHS3和TCTP基因的克隆及检测 | 第44-48页 |
| 3.3.3 Ma-CHS3和Ma-TCTP的全长cDNA序列分析 | 第48页 |
| 3.3.4 Ma-CHS3 和 Ma-TCTP 基因编码氨基酸的同源比对及构建系统进化树 | 第48-52页 |
| 3.3.5 Ma-CHS3 和 Ma-TCTP 基因编码蛋白疏水/亲水性的预测和分析 | 第52-54页 |
| 3.3.6 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白跨膜分析 | 第54-55页 |
| 3.3.7 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白的信号肽序列分析 | 第55-56页 |
| 3.3.8 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因编码蛋白的磷酸化位点分析 | 第56页 |
| 3.3.9 Ma-CHS3和Ma-TCTP基因在高温和低温胁迫下的表达分析 | 第56-58页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第4章 桑树花青素合成酶基因的表达载体构建 | 第60-68页 |
| 4.1 实验材料及试剂 | 第60-62页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.3 主要溶液配置方法 | 第60-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 桑树总RNA的提取（同 2.2.1） | 第62页 |
| 4.2.2 逆转录PCR：同 2.2.3.14 | 第62页 |
| 4.2.3 桑树ANS基因扩增相关特异性引物设计 | 第62页 |
| 4.2.4 桑树ANS基因的全长克隆 | 第62页 |
| 4.2.5 扩增产物的回收与纯化 | 第62页 |
| 4.2.6 ANS基因片段的连接与转化 | 第62页 |
| 4.2.7 ANS基因片段的阳性克隆的鉴定及测序 | 第62页 |
| 4.2.8 质粒抽提 | 第62-63页 |
| 4.2.9 重组载体的构建 | 第63-65页 |
| 4.2.10农杆菌感受态的转化 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-68页 |
| 4.3.1 桑树ANS基因的克隆及序列验证 | 第65-66页 |
| 4.3.2 构建载体的验证 | 第66-68页 |
| 结论与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
