| 附件 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 专业名称縮写中英文对照表 | 第19-20页 |
| 第一章 早期培养对人胚胎干细胞遗传稳定和基因表达的影响 | 第20-33页 |
| 1 背景 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-25页 |
| 2.1 试剂和仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 SNP芯片标本的制备 | 第22-23页 |
| 2.3 Affimetrix SNP 6.0芯片实验流程 | 第23页 |
| 2.4 SNP芯片数据分析 | 第23页 |
| 2.5 表达谱芯片样本的制备 | 第23-25页 |
| 2.6 全基因组表达谱芯片实验流程 | 第25页 |
| 2.7 表达谱芯片样本数据分析 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-31页 |
| 3.1 SNP芯片的结果 | 第25-27页 |
| 3.2 表达谱芯片结果 | 第27-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 5 结论 | 第32-33页 |
| 第二章 生理氧培养能阻止HESCS早期培养阶段普遍发生的DLK1-D103印记区的异常沉默 | 第33-54页 |
| 1 背景 | 第33-34页 |
| 2 材料和方法 | 第34-39页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第34页 |
| 2.2 Solexa小RNA高通量测序 | 第34-35页 |
| 2.3 实时定量RT-PCR方法 | 第35-36页 |
| 2.4 印记调控区域甲基化分析方法 | 第36-37页 |
| 2.5 GEO芯片数据分析方法 | 第37页 |
| 2.6 体内外分化实验 | 第37-38页 |
| 2.7 免疫细胞化学 | 第38页 |
| 2.8 生理氧胚胎干细胞系的分离、培养和鉴定 | 第38-39页 |
| 2.9 单等位表达分析 | 第39页 |
| 2.10 数据分析统计方法 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-52页 |
| 3.1 solexa小RNA深度测序结果显示MEG3的沉默伴随着该印记区miRNAs和snoRNAs的沉默 | 第39-43页 |
| 3.2 DLKl-D103的沉默伴随着相关调控区域的高度甲基化 | 第43-44页 |
| 3.3 胚胎干细胞在培养初始期是一种正常的印记状态 | 第44-45页 |
| 3.4 DLK1-D103印记区的沉默在人多能性细胞中是普遍发生的现象 | 第45-47页 |
| 3.5 在分化过程中MEG3的沉默是不可逆的 | 第47-49页 |
| 3.6 生理氧分离和培养能维持DLK1-DIO3印记区处于正常活化状态 | 第49-50页 |
| 3.7 20%氧浓度分离的hESCs转5%氧浓度培养不能阻止MEG3的沉默 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 第三章 追溯人胚胎干细胞分离和早期培养过程X染色体失活动态变化 | 第54-71页 |
| 1 背景 | 第54-55页 |
| 2 材料和方法 | 第55-57页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第55页 |
| 2.2 荧光定量real-time PCR分析XIST表达 | 第55页 |
| 2.3 XIST启动子甲基化分析 | 第55-56页 |
| 2.4 囊胚收集 | 第56页 |
| 2.5 单等位表达分析 | 第56页 |
| 2.6 RNA POL Ⅱ免疫荧光与X染色体荧光原位杂交的共染 | 第56-57页 |
| 2.7 免疫细胞化学 | 第57页 |
| 2.8 荧光原位杂交FISH | 第57页 |
| 2.9 芯片分析方法 | 第57页 |
| 2.10 迟复制实验 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-68页 |
| 3.1 早期培养过程女性hESCs中XCI状态变化 | 第57-58页 |
| 3.2 XIST基因的沉默伴随着其调控区域的高度甲基化 | 第58-61页 |
| 3.3 hESCs的XCI状态会传递给分化的子代细胞 | 第61页 |
| 3.4 培养初始期和早期的hESCs都有一条失活的X染色体 | 第61-63页 |
| 3.5 XIST阴性的ehESCs中出现了部分X连锁基因的重新活化 | 第63-66页 |
| 3.6 早期培养过程XCI模式从随机失活转变为完全偏斜失活 | 第66页 |
| 3.7 生理氧培养有利于女性hESCs维持正常的XCI状态 | 第66-67页 |
| 3.8 hESCs建系过程XCI状态动态变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 下一步的研究计划 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 综述 | 第79-87页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
