| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 氧化应激 | 第11-15页 |
| 1.1 氧化应激的概念及其机制 | 第11-13页 |
| 1.1.1 氧化应激的概念 | 第11页 |
| 1.1.2 氧化应激的机制 | 第11-13页 |
| 1.2 氧化应激的病理危害 | 第13-14页 |
| 1.3 氧化应激与肝损伤 | 第14-15页 |
| 2 氧化应激与CYP2E1 | 第15-17页 |
| 3 氧化应激与细胞凋亡 | 第17页 |
| 4 黄芪与氧化应激 | 第17-19页 |
| 4.1 黄芪及其成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷、芒柄花素)的药理研究 | 第17-19页 |
| 4.2 黄芪的抗氧化作用 | 第19页 |
| 5 本试验的研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 细胞生长曲线的绘制及氧化损伤模型的建立 | 第21-28页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| 1.1 细胞株 | 第21页 |
| 1.2 主要药物与试剂 | 第21页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-24页 |
| 2.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.1.1 细胞传代 | 第22-23页 |
| 2.1.2 细胞冻存 | 第23页 |
| 2.1.3 冻存细胞的复苏 | 第23页 |
| 2.2 台盼蓝拒染法活细胞计数 | 第23页 |
| 2.3 MTT法检测细胞活力 | 第23-24页 |
| 2.3.1 MTT法绘制Chang Liver细胞生长曲线 | 第23-24页 |
| 2.3.2 MTT法筛选药物安全浓度及H_2O_2损伤浓度 | 第24页 |
| 2.4 数据处理 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| 3.1 Chang Liver细胞生长曲线的绘制 | 第24-25页 |
| 3.2 Chang Liver细胞的形态学观察 | 第25页 |
| 3.3 药物安全浓度及H_2O_2损伤浓度的筛选 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 黄芪三种成分对氧化损伤细胞增殖及细胞外液中转氨酶活性的影响 | 第28-38页 |
| 1 材料 | 第28页 |
| 1.1 主要药物与试剂 | 第28页 |
| 1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-30页 |
| 2.1 MTT法检测细胞活力 | 第28-29页 |
| 2.2 流式细胞术检测细胞周期 | 第29页 |
| 2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第29-30页 |
| 2.4 DNA ladder法检测细胞凋亡 | 第30页 |
| 2.5 酶标法检测细胞外液中转氨酶活性 | 第30页 |
| 2.6 数据处理 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-36页 |
| 3.1 药物对氧化损伤细胞存活率的影响 | 第30-31页 |
| 3.2 药物对氧化损伤细胞形态及数目的影响 | 第31-32页 |
| 3.3 药物对氧化损伤细胞周期的影响 | 第32-33页 |
| 3.4 药物对氧化损伤细胞凋亡的影响 | 第33-35页 |
| 3.5 药物对氧化损伤细胞外液中转氨酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 黄芪三种成分对氧化损伤细胞抗氧化能力的影响 | 第38-44页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| 1.1 主要药物与试剂 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第38页 |
| 1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| 2.1 酶标法、比色法检测内源性抗氧化体系相关指标 | 第38-39页 |
| 2.2 DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧水平 | 第39页 |
| 2.3 数据处理 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 药物对氧化损伤细胞内源性抗氧化体系的影响 | 第39-41页 |
| 3.2 药物对氧化损伤细胞内活性氧水平的影响 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 黄芪三种成分对氧化损伤细胞CYP2E1的影响 | 第44-61页 |
| 1 材料 | 第44-47页 |
| 1.1 主要药物与试剂 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第44-47页 |
| 1.2.1 肝微粒体制备相关试剂 | 第45页 |
| 1.2.2 Western Blot检测相关试剂 | 第45-47页 |
| 1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-54页 |
| 2.1 分光光度法检测肝微粒体CYP2E1活性 | 第47-48页 |
| 2.1.1 肝微粒体的制备 | 第47-48页 |
| 2.1.2 氨基吡啉-N-脱甲基酶活性的测定 | 第48页 |
| 2.2 Real-time PCR法检测CYP2E1 mRNA的表达情况 | 第48-51页 |
| 2.2.1 提取细胞总RNA | 第48-49页 |
| 2.2.2 细胞总RNA样品的质量检测(纯度及完整性) | 第49页 |
| 2.2.3 反转录制备cDNA样品 | 第49-50页 |
| 2.2.4 Real-time PCR检测 | 第50-51页 |
| 2.3 Western Blot法检测CYP2E1蛋白的表达水平 | 第51-54页 |
| 2.3.1 提取细胞总蛋白 | 第51-52页 |
| 2.3.2 蛋白电泳 | 第52页 |
| 2.3.3 转膜 | 第52-53页 |
| 2.3.4 免疫反应 | 第53页 |
| 2.3.5 化学发光,显影,定影 | 第53-54页 |
| 2.3.6 凝胶图像分析 | 第54页 |
| 2.4 数据处理 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| 3.1 药物对氧化损伤细胞肝微粒体CYP2E1活性的影响 | 第54-55页 |
| 3.1.1 标准曲线绘制结果 | 第54页 |
| 3.1.2 氨基吡啉-N-脱甲基酶活性检测结果 | 第54-55页 |
| 3.2 药物对氧化损伤细胞CYP2E1 mRNA表达的影响 | 第55-58页 |
| 3.2.1 细胞总RNA样品的质量检测 | 第55-56页 |
| 3.2.2 目的基因CYP2E1和内参基因GAPDH的标准曲线 | 第56-58页 |
| 3.2.3 Real-time PCR检测的相对定量结果 | 第58页 |
| 3.3 药物对氧化损伤细胞CYP2E1蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 1 结论 | 第61页 |
| 2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 附录一 英文缩略词表(Abbreviation) | 第73-74页 |
| 附录二 试验主要仪器 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
