| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1. 综述进展 | 第8-20页 |
| 1.1 木质素合成研究进展 | 第9-13页 |
| 1.1.1 木质素的结构和种类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 木质素合成途径及相关酶 | 第10-12页 |
| 1.1.3 木质素单体合成及调控 | 第12-13页 |
| 1.2 CCoAOMT研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 CCoAOMT基因家族 | 第13页 |
| 1.2.2 保守性及同源性分析 | 第13-14页 |
| 1.2.3 CCoAOMT基因的表达特性 | 第14-15页 |
| 1.2.4 CCoAOMT及其在木质素合成中的作用 | 第15页 |
| 1.2.5 CCoAOMT对木质素生物合成的调控 | 第15-17页 |
| 1.3 木质素合成研究趋势 | 第17-19页 |
| 1.3.1 多基因共整合载体的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 木质部特异性启动子的应用 | 第18页 |
| 1.3.3 转录因子的调控 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的内容和意义 | 第19-20页 |
| 2. 材料方法 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.4 试剂及配方 | 第21页 |
| 2.1.4.1 常用试剂 | 第21页 |
| 2.1.4.2 常用药品配方 | 第21页 |
| 2.1.5 常用引物 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-37页 |
| 2.2.1 植物RNA提取和cDNA的合成 | 第22-24页 |
| 2.2.1.1 Trizol法提取植物RNA: | 第22页 |
| 2.2.1.2 DNA消化 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 反转录及cDNA合成 | 第23-24页 |
| 2.2.2 基因的克隆及载体构建 | 第24-27页 |
| 2.2.2.1 用ExTaq Mix进行基因克隆 | 第24页 |
| 2.2.2.2 DNA片段的回收和定量 | 第24-25页 |
| 2.2.2.3 pGWC-T酶切及回收产物与入门载体pGWC-T的连接: | 第25页 |
| 2.2.2.4 质粒转化大肠杆菌感受态: | 第25页 |
| 2.2.2.5 质粒提取: | 第25-26页 |
| 2.2.2.6 表达载体的构建; | 第26页 |
| 2.2.2.7 农杆菌感受态细胞制备及重组质粒转化根癌农杆菌 | 第26-27页 |
| 2.2.2.8 农杆菌介导的拟南芥花序转化及转基因植株的筛选 | 第27页 |
| 2.2.3 植物基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 荧光定量实时PCR | 第28页 |
| 2.2.5 RNA原位杂交实验: (整个过程要求RNase-free) | 第28-34页 |
| 2.2.5.1 原位杂交材料的准备 | 第28-29页 |
| 2.2.5.2 转录模板的扩增和探针的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.5.3 杂交步骤: | 第30-32页 |
| 2.2.5.4 杂交后处理: | 第32-34页 |
| 2.2.6 木质素含量变化 | 第34-37页 |
| 2.2.6.1 石蜡切片的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.6.2 次生细胞壁染色观察 | 第35-36页 |
| 2.2.6.3 间苯三酚染色法 | 第36页 |
| 2.2.6.4 木质素含量定量检测 | 第36-37页 |
| 3. 结果与讨论 | 第37-49页 |
| 3.1 南荻MICCoAOMT1基因的克隆及载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2 CCoAOMT同源性分析 | 第38-41页 |
| 3.3 MICCoAOMT1的组织表达分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 Real Time-PCR分析MICCoAOMT1在南荻不同组织中的表达 | 第41页 |
| 3.3.2 RNA原位杂交分析MICCoAOMT1在南荻茎中的表达 | 第41-44页 |
| 3.5 拟南芥遗传转化及阳性苗的筛选及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.6 突变体及转基因拟南芥木质素含量变化 | 第45-49页 |
| 3.6.1 次生细胞壁变化 | 第45-46页 |
| 3.6.2 间苯三酚检测木质素分布及组成变化 | 第46-47页 |
| 3.6.3 木质素含量的测定 | 第47-49页 |
| 4. 小结与展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 在校期间发表的论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
