| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 鸭病毒性肠炎概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 临床症状与病理剖检 | 第13-14页 |
| 1.1.2 诊断 | 第14-15页 |
| 1.1.3 鸭病毒性肠炎的防治 | 第15-16页 |
| 1.2 鸭肠炎病毒研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 DEV的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 DEV的分子生物学特性 | 第17-18页 |
| 1.2.3 鸭肠炎病毒US10基因和UL44基因的研究进展 | 第18页 |
| 1.3 疱疹病毒载体研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 基因缺失疫苗 | 第19页 |
| 1.3.2 重组活载体疫苗 | 第19-20页 |
| 1.3.3 DEV重组病毒 | 第20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒、载体、菌株、和毒株 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂及抗体 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 重组病毒转移载体的构建 | 第22-27页 |
| 2.2.1 重组病毒转移载体的构建策略 | 第22页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 病毒核酸的提取 | 第23页 |
| 2.2.4 同源臂的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.5 PCR产物的纯化与亚克隆 | 第24页 |
| 2.2.6 重组阳性质粒的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 左、右同源臂连接 | 第25页 |
| 2.2.8 pMD18-T-gpt表达盒的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.9 缺失病毒转移载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 重组病毒的构建与筛选 | 第27-29页 |
| 2.3.1 重组转移载体质粒的大量制备 | 第27-28页 |
| 2.3.2 DEV全基因组与重组转移载体质粒共转染 | 第28页 |
| 2.3.3 重组病毒的筛选及纯化 | 第28-29页 |
| 2.4 DEV US10抗血清的制备 | 第29-31页 |
| 2.4.1 US10基因引物设计与合成 | 第29页 |
| 2.4.2 US10基因表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.4.3 US10基因的诱导表达及纯化 | 第30页 |
| 2.4.4 US10重组蛋白的免疫原性鉴定 | 第30页 |
| 2.4.5 US10抗血清的制备 | 第30页 |
| 2.4.6 US10抗血清的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5 重组病毒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.5.1 引物设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.5.2 重组病毒的PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.5.3 DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44基因表达产物的间接免疫荧光检测 | 第32页 |
| 2.6 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生物学特性的基本研究 | 第32-35页 |
| 2.6.1 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的理化特性分析 | 第32-33页 |
| 2.6.2 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的体外稳定性分析 | 第33页 |
| 2.6.3 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒生长曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 2.6.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒噬斑直径大小的比较 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-49页 |
| 3.1 重组病毒转移载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.1.1 重组病毒同源臂基因的扩增 | 第35页 |
| 3.1.2 同源臂重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3 左、右同源臂连接结果 | 第36页 |
| 3.1.4 gpt表达盒基因的获得 | 第36页 |
| 3.1.5 筛选标记gpt基因表达盒的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.6 缺失病毒转移载体的构建 | 第37页 |
| 3.2 重组病毒的构建与筛选 | 第37-38页 |
| 3.3 US10抗血清的制备 | 第38-40页 |
| 3.3.1 US10基因的扩增 | 第38页 |
| 3.3.2 US10基因表达载体构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 US10基因的诱导表达及纯化 | 第39页 |
| 3.3.4 重组蛋白的免疫原性鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 US10抗血清的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.1 抗血清特异性的鉴定 | 第40页 |
| 3.4.2 抗血清反应性的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5 重组病毒的鉴定 | 第41-43页 |
| 3.5.1 重组病毒DEV-ΔUS10的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5.2 重组病毒DEV-ΔUL44的PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.5.3 重组病毒的IFA检测 | 第42-43页 |
| 3.6 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生物学特性的基本研究 | 第43-49页 |
| 3.6.1 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的理化特性分析 | 第43-44页 |
| 3.6.2 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的体外稳定性分析 | 第44-46页 |
| 3.6.3 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生长曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 3.6.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒蚀斑直径大小的比较 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 重组病毒筛选方法的选择 | 第49页 |
| 4.2 重组病毒的鉴定 | 第49页 |
| 4.3 US10抗血清的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44体外基本生物学特性研究 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
