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缺失US10,UL44基因重组鸭肠炎病毒的构建与重组病毒基本生物学特性研究

摘要第10-11页
Abstract第11-12页
1 前言第13-21页
    1.1 鸭病毒性肠炎概述第13-16页
        1.1.1 临床症状与病理剖检第13-14页
        1.1.2 诊断第14-15页
        1.1.3 鸭病毒性肠炎的防治第15-16页
    1.2 鸭肠炎病毒研究进展第16-18页
        1.2.1 DEV的生物学特性第16-17页
        1.2.2 DEV的分子生物学特性第17-18页
        1.2.3 鸭肠炎病毒US10基因和UL44基因的研究进展第18页
    1.3 疱疹病毒载体研究进展第18-20页
        1.3.1 基因缺失疫苗第19页
        1.3.2 重组活载体疫苗第19-20页
        1.3.3 DEV重组病毒第20页
    1.4 本研究的目的与意义第20-21页
2 材料与方法第21-35页
    2.1 材料第21-22页
        2.1.1 试验动物第21页
        2.1.2 质粒、载体、菌株、和毒株第21页
        2.1.3 主要试剂及抗体第21页
        2.1.4 主要仪器第21-22页
    2.2 重组病毒转移载体的构建第22-27页
        2.2.1 重组病毒转移载体的构建策略第22页
        2.2.2 引物设计与合成第22-23页
        2.2.3 病毒核酸的提取第23页
        2.2.4 同源臂的扩增第23-24页
        2.2.5 PCR产物的纯化与亚克隆第24页
        2.2.6 重组阳性质粒的筛选与鉴定第24-25页
        2.2.7 左、右同源臂连接第25页
        2.2.8 pMD18-T-gpt表达盒的构建第25-26页
        2.2.9 缺失病毒转移载体的构建第26-27页
    2.3 重组病毒的构建与筛选第27-29页
        2.3.1 重组转移载体质粒的大量制备第27-28页
        2.3.2 DEV全基因组与重组转移载体质粒共转染第28页
        2.3.3 重组病毒的筛选及纯化第28-29页
    2.4 DEV US10抗血清的制备第29-31页
        2.4.1 US10基因引物设计与合成第29页
        2.4.2 US10基因表达载体的构建第29-30页
        2.4.3 US10基因的诱导表达及纯化第30页
        2.4.4 US10重组蛋白的免疫原性鉴定第30页
        2.4.5 US10抗血清的制备第30页
        2.4.6 US10抗血清的鉴定第30-31页
    2.5 重组病毒的鉴定第31-32页
        2.5.1 引物设计与合成第31-32页
        2.5.2 重组病毒的PCR鉴定第32页
        2.5.3 DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44基因表达产物的间接免疫荧光检测第32页
    2.6 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生物学特性的基本研究第32-35页
        2.6.1 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的理化特性分析第32-33页
        2.6.2 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的体外稳定性分析第33页
        2.6.3 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒生长曲线的绘制第33-34页
        2.6.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒噬斑直径大小的比较第34-35页
3 结果第35-49页
    3.1 重组病毒转移载体的构建第35-37页
        3.1.1 重组病毒同源臂基因的扩增第35页
        3.1.2 同源臂重组质粒的鉴定第35-36页
        3.1.3 左、右同源臂连接结果第36页
        3.1.4 gpt表达盒基因的获得第36页
        3.1.5 筛选标记gpt基因表达盒的鉴定第36-37页
        3.1.6 缺失病毒转移载体的构建第37页
    3.2 重组病毒的构建与筛选第37-38页
    3.3 US10抗血清的制备第38-40页
        3.3.1 US10基因的扩增第38页
        3.3.2 US10基因表达载体构建第38-39页
        3.3.3 US10基因的诱导表达及纯化第39页
        3.3.4 重组蛋白的免疫原性鉴定第39-40页
    3.4 US10抗血清的鉴定第40-41页
        3.4.1 抗血清特异性的鉴定第40页
        3.4.2 抗血清反应性的鉴定第40-41页
    3.5 重组病毒的鉴定第41-43页
        3.5.1 重组病毒DEV-ΔUS10的PCR鉴定第41-42页
        3.5.2 重组病毒DEV-ΔUL44的PCR鉴定第42页
        3.5.3 重组病毒的IFA检测第42-43页
    3.6 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生物学特性的基本研究第43-49页
        3.6.1 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的理化特性分析第43-44页
        3.6.2 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44的体外稳定性分析第44-46页
        3.6.3 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44生长曲线的绘制第46-47页
        3.6.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44与亲本病毒蚀斑直径大小的比较第47-49页
4 讨论第49-51页
    4.1 重组病毒筛选方法的选择第49页
    4.2 重组病毒的鉴定第49页
    4.3 US10抗血清的鉴定第49-50页
    4.4 重组病毒DEV-ΔUS10/DEV-ΔUL44体外基本生物学特性研究第50-51页
5 结论第51-52页
致谢第52-53页
参考文献第53-57页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第57页

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